9.1　Wnd对于Egr诱导的细胞死亡及JNK活化是必需的

我们通过遗传筛选还得到另外一个候选基因-wallenda（wnd），其蛋白产物Wnd是MAPKKK家族成员，已知功能包括调控神经肌肉结合处突触生长及轴突的运输和降解[74，165，166]。我们发现GMR＞Egr诱导的小眼表型（图9-1 B）能够被wnd的RNAi及突变体部分抑制（图9-1 C，D），但抑制效果弱于突变hep或mkk4这两个MAPKK编码基因（图9-1 E，F）。而已有研究发现突变另外一个MAPKKK编码基因d TAK1能够更好地抑制Egr诱导的小眼表型[60]，表明wnd只是参与了部分Egr诱导的细胞死亡调节。与此相符的是，我们发现下调wnd表达只能部分抑制Egr在眼部诱导的细胞死亡（图9-1 B′—C′）及puc转录激活（图9-1 B″—C″）。

我们也在翅成虫盘对Egr与Wnd的遗传学关系进行了验证，同样地，在ptc-Gal4作用下过表达Egr诱导的翅脉丢失（图9-1 G，G′为G中虚线框放大照），细胞死亡（图9-1 K）及puc激活表型（图9-1 N）都能被过表达wnd的RNAi所抑制（图9-1 I，L，O）。以上实验结果充分证明Wnd对于Egr诱导的细胞死亡及JNK活化是必需的。

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图9-1　Wnd调控了果蝇眼部及翅膀Egr过表达引起的细胞死亡及JNK活化（见彩图23）

（A—F）果蝇成虫眼部光学显微镜照片及眼成虫盘染色照片。与对照相比（A—A″），GMR＞Egr产生的眼部变小（B），细胞死亡（B′）及puc激活（B″）表型都能被wnd RNAi（C—C″）抑制，GMR＞Egr小眼表型也能被wnd突变体（D），hep（E）及mkk4（F）杂合突变体很好地抑制。（G—I）果蝇成虫翅膀光学显微镜照片及翅成虫盘染色照片。与对照相比（G，J，M），ptc＞Egr产生的翅脉丢失（H），细胞死亡（K）及puc激活（N）都能被wnd RNAi（I，L，O）抑制。（A，A′）GMR-Gal4/+.（B，B′）UAS-Egr/GMR-Gal4.（C，C′）UAS-Egr/GMRGal4；UAS-wnd-IR/+.（A″）GMR-Gal4/+；puc E69/+.（B″）UAS-Egr/GMRGal4；pucE69/+.（C″）UAS-Egr/GMR-Gal4；UAS-wnd-IR/+；puc E69/+.（D）UASEgr/GMR-Gal4；wnd1/wnd3.（E）hep1/Y；UAS-Egr/GMR-Gal4.（F）UAS-Egr/GMRGal4；mkk4G673/+.（G，G′，J）ptc-Gal4/+.（H，H′，K）ptc-Gal4/UAS-Egr.（I，I′，L）ptc-Gal4/UAS-Egr；UAS-wnd-IR/+.（M）ptc-Gal4/+；puc E69/+.（N）ptc-Gal4/UAS-Egr；puc E69/+.（O）ptc-Gal4/UAS-Egr；UAS-wnd-IR/puc E69。