9.2　Rac1诱导Wnd-JNK介导的眼部细胞死亡

图9-2　Rac1诱导的小眼表型依赖JNK信号通路

果蝇成虫眼部光学显微镜照片。过表达Bsk DN或Puc可以很强的抑制GMR＞Rac1产生的小眼表型（B，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/+.C，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UASBsk DN.D，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-Puc），下调hep（E，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-hep-IR），mkk4（F，UAS-Rac1WT/+；UAS-mkk4-IR/+；GMRGal4/+）及wnd（G，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-wnd-IR）也能较好抑制该表型，下调mekk1（J，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-mekk1-IR），Ask（K，UASRac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-Ask DN）及slpr（L，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UASwnd-IR）只能微弱抑制该小眼表型，而下调d TAK1却完全不能抑制该表型（H，UASRac1WT/d TAK11；GMR-Gal4/+.I，UAS-Rac1WT/+；GMR-Gal4/UAS-d TAK1 DN）。

除了Egr能够诱导JNK介导的细胞死亡外，过表达GTPase家族成员Rac1也能够诱导细胞死亡（图9-3 F）并产生小眼表型（图9-2 B）[167]，该表型能够被Bsk DN或者Puc很好地抑制（图9-2 C，D），表明其依赖于JNK信号通路。果蝇中存在两个Bsk的激酶，分别为MKK4及Hep，研究表明两者都参与并调节了Egr诱导的细胞死亡[81]。与此相同的是，我们发现Rac1诱导的小眼表型也能够分别被下调hep或者mkk4所抑制（图9-2 E，F）。接着我们又检测了上游MAPKKK家族成员对该表型的影响，包括Mekk1，Ask1（Apoptotic signal-regulating kinase 1），Slipper（Slpr），Wnd和d TAK1。结果显示下调mekk 1及Ask活性可以微弱的抑制GMR＞Rac1小眼表型（图9-2 J，K）；下调slpr同样部分抑制该表型（图9-2 L），这与之前研究结果相符[167]；我们发现过表达wnd RNAi的抑制效果最为明显（图9-2 G），不但能显著性地抑制GMR＞Rac1引起的细胞死亡（图9-3 E—G），还阻断了Rac1对puc的激活（图9-3 A—C），表明Wnd是Rac1下游诱导细胞死亡的重要调控蛋白；而相反的是，我们发现无论是d TAK1的突变体或者过表达d TAK1的负显性都完全不能抑制Rac1引起的小眼表型（图9-2 H，I），同样也不能抑制Rac1引起的死亡及JNK激活（图9-3 D，H）。以上实验结果表明MAPKKK成员对Rac1诱导的小眼表型调控存在冗余性，而Wnd很有可能扮演着最重要的角色。(https://www.daowen.com)

图9-3　Wnd调控Rac1诱导的细胞死亡及JNK激活（见彩图24）

果蝇成虫眼部光学显微镜照片。过表达Rac1引起的puc转录激活（B，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4/+；puc E69/+）及细胞死亡（F，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4）能够被wnd RNAi部分抑制（C，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4/+；puc E69/UAS-wnd-IR.G，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4/UAS-wnd-IR），却不会因d TAK1的改变而受到影响（D，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4/+；UAS-d TAK1-IR/puc E69.H，UAS-Rac1 WT/+；GMR-Gal4/UAS-d TAK1-IR）。