一、热原检查法
热原是微生物的代谢产物，即能引起恒温动物和人体体温异常升高的致热物质，包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。热原进入血液后被吞噬细胞吞噬而产生内源性致热原（内热原），作用于下丘脑体温调节中枢，结果使动物体温上升，引起发热等一系列不良反应，必须严格控制。除另有规定外，静脉用注射剂和冲洗剂均需进行热原或细菌内毒素的检查。
《中国药典》中，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
（一）仪器与用具
天平[感量为0.01 mg或0.1 mg（称量供试品用）、感量为0.1 mg或感量为1 mg（称量试剂用）、感量为10 g（称量家兔用）]；电热干燥箱（250℃以上，受热均匀）；恒温水浴；热原测温仪或肛门体温计（精度0.1℃）；家兔固定盒；直镊；金属制密封器（均需除热原）；时钟；脱脂棉或细软卫生纸；注射器；烧杯；三角瓶；大称量瓶；吸管；移液管；表面皿；玻璃棒；广口试剂瓶等。
（二）实验动物
供热原检查的试验用家兔应健康无伤，体重1.7 kg以上至4.0 kg左右（生物制品检测用家兔体重1.7～3.0 kg），雌兔应无孕。预测体温前7 d即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。未曾用于热原的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前3～7 d内预测体温，进行挑选。测温的条件与热原检查要求相同，仅不注射药液。测量体温时，测温仪探头或肛门温度计插入肛门的深度各兔应相同，约6 cm，测温时间不得少于1.5 min。每隔30 min测量体温1次，共测8次。8次体温均在38.0～39.6℃（一般多选用38.4～39.4℃）的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，可供3周内热原检查使用。用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48 h方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上，对于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5 d内重复使用一次。如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
（三）实验前的准备
1.仪器与用具 测温仪或肛门温度计每3～6个月校验一次，如有异常随时校验，不符合要求者不能使用。热原检查的用具应除热原，具体方法是清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直镊等放入金属制容器内，密闭，置电热干燥箱中250℃加热30 min以上或200℃加热1小时以上或180℃加热2 h以上加热除热原。控温时间应从达到规定温度时开始计时。去除热原未曾开启的密封容器内用具，可供一周内使用。
2.试验用家兔 每批供试品初试用3只家兔，复试用5只家兔。在做热原检查前1～2 d，供试用家兔应尽可能处于同一温度的环境中，实验室和饲养室的温度相差不得大于3℃，且应控制在17～25℃，在试验全部过程中，实验室温度变化不得大于3℃，应防止动物骚动并避免噪声干扰。家兔在试验前至少1 h开始停止给食，并置于宽松适宜的装置中，直至试验完毕。测量家兔体温时，测温探头或肛温计插入肛门的深度和时间各兔应相同，深度一般约6 cm，时间不得少于1.5 min，每隔30 min测量体温1次，一般测量2次，2次体温之差不得超过0.2℃，以此2次体温的平均值作为该兔的正常体温。当日使用的家兔，正常体温应在38.0～39.6℃的范围内，且同组各兔间正常体温之差不得超过1℃。
（四）检查方法
（1）选符合规定的家兔3只，停止给饲料，称重后置于家兔固定盒内至少1 h，头部固定应宽松适宜，以适用于体重不同的动物。
（2）在测定家兔正常体温后15 min内自耳静脉缓缓注入规定剂量并温热至约38℃的供试品溶液，注射药液需缓慢，注射速度（除另有规定外）一般为每兔4～5 min，每分钟4～8 mL。
（3）药液注射完毕后。每隔30 min测量体温一次，连续测量6次。6次体温中最高的一次减去正常体温，即为该兔体温的升高温度（℃）。当家兔体温升温为负值时，均以0℃计。
（五）结果判断
（1）有下列情况之一者，复试一次：3只家兔中1只体温升高0.6℃或0.6℃以上；3只家兔升温均低于0.6℃，但3只家兔升温总和达1.3℃或1.3℃以上。
（2）符合下列情况者，判为符合规定：在初试3只家兔中，体温升高均低于0.6℃，并且3只家兔体温升高总和低于1.3℃，或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔不超过1只，并且初试、复试合并8只家兔的体温升高总和为3.5℃或3.5℃以下。
（3）有下列情况之一者，判为不符合规定：在初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔超过1只；或在初试、复试合并8只家兔的体温升高总和超过3.5℃。
（六）注意事项
（1）试验时应尽量使用热原测温仪测温，因为其感温探头在整个测温过程中都置于兔肛门内，兔较安静，所测体温较正确，同时也避免了给药后1 h、2 h、3 h测温这项规定造成的漏检。
（2）热原实验室内外应保持安静，避免强烈直射的日光或灯光及其他刺激。室温应为17～25℃，且在全部试验过程中，室温变化不得大于3℃。
（3）有的供试品如腺苷三磷酸二钠注射时要注意反应速度应缓慢，否则易造成家兔死亡。
（4）试验过程中，要及时填写兔卡及原始记录。