三、其他方法
利用药物与杂质化学性质的不同,如酸碱性的差异、氧化还原性的差异、杂质与一定试剂反应生成沉淀、颜色、气体等现象,可检查药物中所含杂质是否符合限量规定。当杂质与试剂产生颜色时采用比色法(目视比色法、分光光度法),当杂质与试剂产生沉淀时采用比浊法;当杂质与试剂产生气体时用气体检查法检查杂质的限量。也可利用药物与杂质旋光活性的不同来检查,即旋光法。若杂质具有酸性或碱性时,可用碱或酸滴定液滴定,以消耗碱或酸滴定液的量检查药物中酸、碱性杂质的限量(酸碱中和反应原理);若杂质具有氧化性或还原性时,可用还原性或氧化性滴定液滴定(氧化还原反应原理),以消耗滴定液的量检查杂质的限量。常用方法如下:
(一)滴定法
利用药物与杂质化学性质不同,选择适当的滴定液,规定消耗一定浓度滴定液的量来检查药物中的杂质。
例如,《中国药典》采用铈量法检查天然型维生素E中未酯化的生育酚。
检查方法:取本品0.10 g,加无水乙醇5 mL,溶解后,加二苯胺试液1滴,用硫酸铈滴定液(0.01 mol/L)滴定,消耗的硫酸铈滴定液(0.01 mol/L)不得超过1.0 mL(限量2.1%)。
原理:利用生育酚具有还原性,可被硫酸铈定量氧化,通过在规定条件下,限制硫酸铈滴定液(0.01 mol/L)的限量来检查生育酚的限量,而维生素E是生育酚的醋酸酯,不水解不与硫酸铈反应。生育酚与硫酸铈反应如下:
(二)显色法
利用灵敏、专属的显色反应检查药物中的杂质,方法简单、易行。
如贝诺酯项下“对氨基酚”的检查(《中国药典》):取供试品1.0 g,加甲醇溶液(1→2)20 mL,搅匀,加入碱性亚硝基铁氰化钠试液1 mL,摇匀,静置30 min,不得显蓝绿色。其原理为对氨基酚在一定条件下可与碱性亚硝基铁氰化钠反应呈色,而贝诺酯无此反应,以供试品不显色为合格来检查杂质限量。
(三)旋光法
若药物和杂质的立体构型不同,旋光性也不同,可以利用旋光性质的差异来检查药品纯度。方法有:
(1)若杂质有旋光性而药物本身没有旋光性,则可以通过限定一定浓度药物溶液的旋光度值来检查相应杂质的量。
例如,《中国药典》硫酸阿托品中莨菪碱的检查:取本品,加水溶解并稀释成1 mL中含50 mg的溶液,依法测定(通则0621),旋光度不得过-0.40°。
硫酸阿托品为外消旋体,无旋光性,而莨菪碱为左旋体,《中国药典》规定旋光度的数值可检查莨菪碱的量(2.46%)。
(2)规定一定浓度供试品溶液的比旋度控制药物中杂质的量 比旋光度可反映药物的纯度,限定杂质的含量。
例如,《中国药典》黄体酮项下规定:1 mL含10 mg黄体酮的乙醇溶液,25℃时比旋度为+186°~+198°,如供试品的测定值不在此范围,则表明其纯度不符合要求。这是因为黄体酮及其生产中间体(醋酸双烯醇酮、醋酸妊娠烯醇酮及妊娠烯醇酮)在乙醇中的比旋度差异很大,若供试品中所含的这些杂质超过限量,则测得的比旋度将偏离规定范围。