水体感染性调查

更新于 2026年10月10日 版权声明
四、水体感染性调查

调查生产、生活环境水体尾蚴分布和数量(感染性),通过水体感染性测定,可以掌握尾蚴的地点、季节和时间分布,及时做好风险防范和预警,为有针对性地采取预防控制措施提供依据。调查的方法有粘取法或网捞法,有条件的地区可用小白鼠感染法。

(一)粘取法

粘触材料目前以260孔/25.4 mm的尼龙纱较妥。但也可选用其他光滑的材料,如卡普隆、绸布、绢纱或滤纸等。将尼龙纱制成长80 cm、宽10 cm的长条,两端缝在竹(木)竿上,竿长以1~2 m为宜。双手持竿,展开尼龙纱,在需要调查的水面粘触。现场调查时,每粘触8~10 m2的水面后,可将尼龙纱条卷在竿的一端。如水面杂质过多,则以尼龙纱条按在水面下轻轻漂除黏附杂质,然后在水面卷起或在水中卷起,将已卷起的尼龙纱条,放入盛有5%甲醛(福尔马林)的500 ml量杯内,自竿的一端慢慢地卷向另一端,同时轻轻抖动,将死了的尾蚴洗入液中。然后将尼龙纱条在水中洗去甲醛(或在所调查的河道、塘汊中洗),洗后继续顺次粘触。粘完一定面积的水面后,将甲醛液静置0.5小时,徐徐倾去杯中悬液,留取沉渣30~50 ml。在现场调查时,沉淀步骤可在野外进行,以小玻璃瓶将沉渣带回检查。将沉渣倒入直径约9 cm的平皿中,加3%碘液约10滴,放在划有方格的小玻璃板上,在双目解剖镜下,逐格检查,鉴别并计数尾蚴。

一般情况下,一次调查水面面积40~60 m2,每粘触8~10 m2,卷洗1次,共洗5~6次,操作0.5小时。如各次调查均按同一规格进行,可作出尾蚴数量上的相互比较。本法调查尾蚴,可按粘触水面的面积或操作时间为尾蚴的计算方法,但不论根据何者计算,各次调查的水面面积、卷洗次数、操作时间均应统一。

滤纸粘取法为用一定大小的滤纸多张,每张粘触水面1次,取回用1%酸性大红盐酸溶液染色,使整个滤纸变红色。用1%盐酸反复滴于滤纸上脱色,直到滤纸转为白色或淡红色为止。这时尾蚴仍为红色。在双目解剖镜下计数尾蚴。纸上可以放一块有方格的玻片,便于计数。

(二)网捞法

用细卡普隆纱布,制成尖底漏斗形的捞网,网的大小可以任意选择。剪去网尖端约3~5 cm,再用绳扎起来。将网在检查的水面或水体中捞若干次。解去尖端的绳子,先用5%甲醛(福尔马林)溶液冲1次,杀灭网上的尾蚴。再用清水冲洗网面。将全部洗下的水,通过平底玻璃漏斗,抽气过滤。滤板上放一块圆形滤纸,边缘与滤器壁密切相贴,使尾蚴皆留于滤纸上,用1%酸性大红盐酸溶液染色。在解剖镜下检查并计数尾蚴。

(三)小白鼠感染法

又称“哨鼠”感染法。将未感染过血吸虫尾蚴的小白鼠作为哨鼠,装入两边置有浮筒(或能浮的泡沫塑料)的特制铁丝笼内,放入欲测定感染性的自然水体中,使小白鼠的四肢、腹部和尾巴等接触疫水水面一定时间,每点放置20只体重大于20 g的小鼠,分成2笼,安装必要的防晒和防雨设施,避免太阳直射和雨淋,降低哨鼠死亡率。每次检测时间为2天,每天于10:00~14:00测定4小时,每笼间隔10~20 m,鼠笼可以在水面拖动,提高尾蚴检获率。然后取出小鼠,分别饲养,35天后解剖,检查小白鼠体内的血吸虫虫数及肝脏虫卵肉芽肿情况。气温、水温较低的情况下,不宜用本法检查疫水感染性,因小白鼠容易死亡。在放置小白鼠时,要有人看守,以防水蛇吞食或伤害;同时记录当时的气温、水温、流速、风向等。水的感染性可用哨鼠的感染率和感染度表示。

哨鼠感染率(%)=感染哨鼠数/解剖哨鼠数×100%

哨鼠感染度=检获成虫总数/解剖哨鼠数

(四)C-6膜黏附法

应用C-6膜黏附水面尾蚴,平均获蚴率可达40%。在粘蚴后的膜面上直接喷布CS16染液,可使尾蚴着染黄、蓝双色,体态完好率高,从而识别尾蚴可靠,所获检测结果准确。该法操作简单、快速、费用不高。

1.检测工具 主要有C-6膜,载膜具(20 cm×17 cm的浮板和固定膜的压框)2只,CS16染液及喷筒,存膜读数板30块,另备3 m左右细竹竿1根,镊子2把,橡皮手套,书写记录笔纸和温度计等。(https://www.daowen.com)

2.操作步骤 取C-6膜1张,固定于载膜具上,使膜面向下和挂竹竿端。持竿使膜面平触与自浮待测水面约20秒后,将膜面提出水面。如是每膜共测水面5个点。然后,自竿上去下载膜具,使膜面向上,移膜于2张连铺的读数板上,在膜面喷布CS16染液一薄层,将膜对折,使在1张读数板上,将该存膜板按序插入检测盒内。1小时后至数天内,按序取出存膜板,在双目解剖镜或放大镜(15×)下计数膜上尾蚴数。

所测水面尾蚴密度(条数/m2)=10张膜上检获的尾蚴数×2.5

或=检获尾蚴数×2.5×10÷用膜张数

3.注意事项 ①C-6膜不用不取,保持粘蚴面洁净。②检测时动作轻缓,使膜面平触水面,轻放轻提,以减少水面尾蚴下沉和游离。③喷布染液应避免触及载膜具,喷染后对折的黏膜面内应无气泡,让染液遍布膜面。④每次检测水面至少应在1 m2(即10张膜)以上。注意个人防护。

(五)尾蚴染色方法

尾蚴染色的目的是通过染色后可清楚地观察尾蚴外部形态和内部构造,从而鉴别和确定尾蚴的种类。

1.活体染色法 活体染色法是临时性的。主要是观察虫体生物构造,其染液均为水溶液。常用的溶液有:中性红、灿甲酚蓝、亚甲蓝、茜素以及依文思蓝等。先将染料用水配成1%溶液,使用时根据需要,再加水稀释。染色方法简单,即将尾蚴放在载玻片上,用滴管吸取已稀释之染液1~2滴与尾蚴接触,并加小盖玻片,在显微镜下观察,即可清晰地见到活尾蚴的结构。

2.固定标本染色法 本法又可分为临时和永久染色法两种。临时染色法常用染液为3%~5%碘液及1%酸性大红基溶液。这里主要介绍下永久染色法的操作步骤。

永久染色法:

1)采集尾蚴:将由钉螺逸出的或解剖出来的尾蚴移置于载玻片之中央水滴内,然后用小镊子夹起小盖玻片(用18 mm×18 mm见方盖片,用铅笔划为4块),覆盖于水滴上,使尾蚴均匀撒布于盖玻片下,再用吸水纸吸出盖玻片周围外溢之水。

2)固定:先将标本在酒精灯上略加烤热,须注意切勿使标本干燥,待尾蚴尾部伸直后,再用吸管吸取鲍氏固定液数滴,滴于靠近盖玻片边缘的一边,使固定液渗入盖玻片下。并用吸水纸在盖玻片的另一边吸取,则盖玻片下原有的水分被吸于吸水纸上,而固定液进入整个盖玻片内,尾蚴即被杀死固定。

3)黏合:将盖玻片外溢的液体用吸水纸拭干,用在酒精灯上烤热的铅丝挑起石蜡松香胶一小块,烤至溶解,滴于盖玻片斜对的两个角或四个角上,即可将盖玻片黏固于载玻片上,再在盖玻片周围加上数滴固定液,放置1~4小时。用水缓缓冲洗1分钟,以洗净标本上的固定液。依次通过10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%乙醇各2分钟(通过各级浓度乙醇时均按固定时的方法操作)。

4)染色:①用卡红液染色2~24小时。②用含有0.5%盐酸的70%乙醇按固定时方法操作退色1~8分钟(须在低倍镜下观察,退色至虫体内构造清晰时为止)。③依次通过80%、90%、95%、100%乙醇各2分钟。④通过乙醇与二甲苯混合液2分钟。⑤通过纯二甲苯至虫体透明1分钟。⑥用比较稀的加拿大树胶滴加于盖玻片的一边,以吸水纸从盖玻片另一边吸出,至树胶布满整个盖玻片后,平放待干,然后将多余的树胶刮除,贴上标签。

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