斑点免疫金渗滤法
(一)原理
该方法以硝酸纤维素膜为载体,利用微孔滤膜的可滤过性,使抗原抗体反应和洗涤在一特殊的渗滤装置上以液体渗滤过膜的方式迅速完成。市售的血吸虫病斑点免疫金渗滤法通常将血吸虫抗原预先包被在固相载体硝酸纤维素薄膜上,与血清中的抗血吸虫抗体结合形成抗原抗体复合物,胶体金标记的二抗与血清中的抗血吸虫抗体结合从而呈现颜色反应。
(二)试剂与器材
(1)市售试剂盒配有检测所需的试剂和材料,包括渗滤装置(卡中设置可溶性血吸虫抗原包被的检测点及人IgG包被的质控点)、显色液(胶体金标记的羊抗人IgG)、洗涤液(TBS、吐温-20)。
(2)器材:10~200μl可调节移液器,200μl吸头。
(三)操作方法
(1)取出渗滤装置,在反应孔中间滴加2滴洗涤液,待液体完全渗透。
(2)在反应孔正中央垂直加入25μl待检血清,待血清完全渗透。
(3)加入2滴洗涤液,待洗涤液完全渗透。
(4)加入4滴显色液,待液体完全渗透。
(5)加入2滴洗涤液,待液体完全渗透,观察结果。
(四)结果判读(见图5-5)(https://www.daowen.com)
图5-5 斑点免疫金渗滤试验结果图示
(1)阳性反应:检测孔中出现2个红色圆点为阳性。
(2)阴性反应:检测孔中仅对照处出现一个红色圆点为阴性。
(3)无效:检测孔中无红色圆点表示试剂失效或操作有误。
(五)诊断意义
主要用于血吸虫病辅助诊断,不能作为确诊依据。可用于对血吸虫病人的筛查,需结合疫水接触史、临床症状和粪便病原学检查等结果综合分析。
(六)注意事项
(1)检测样品为血清,应使用新鲜血清标本。
(2)各家市售试剂盒在操作方法上可能存在不同,使用前仔细阅读说明书,并据以操作。
(3)检测前所用试剂先回暖至室温,滴加试剂时,待反应孔上的液体完全渗透后,立即滴加下一种液体,既要避免渗透不全,又要避免反应膜干燥。