军团菌感染与疾病
（一）军团菌感染概述
军团菌广泛存在于自然环境，常存在于空调系统、淋浴水源系统甚至含氯化物的饮水源中，可通过气溶胶吸入肺内引起感染，是医院感染的主要致病菌之一。可以引起人类军团菌感染最多见的为嗜肺军团菌（L.pneumophila）1、6、4血清型和米克戴德军团菌（L.micdacdei）、长滩军团菌（L.longbeachae）、杜莫夫军团菌（L.dumoffii）、波兹曼军团菌（L.bozemanii）等。
（二）军团菌感染疾病范围
1.无症状血清变化。
2.自限性无肺炎的流感样病态，有时叫作庞提阿克热（Pontiac fever）。
3.军团人员病为最严重和最常见到的肺炎类型。
4.局限性，罕见的软组织感染。
（三）军团菌感染鉴定
1. 细菌培养法
军团菌为革兰阴性杆菌，专性需氧、胞内寄生菌。军团菌最初是从以军团菌病人肺组织感染的豚鼠中分离出来的。这种方法虽然有较高的可靠性，但非常昂贵，而且费时费力，不久就被平板培养法所取代。目前标准培养基为活性炭酵母浸膏琼脂平板，也称军团菌生长平板（BCYE）。接种在BCYE 上的样品在温度为35～37 ℃，培养10 d，在浓度为2.5% CO2的环境下培养更有利于军团菌的生长。军团菌的菌落通常呈白色、灰色，有荧光。军团菌在BCYE上生长而在平板和半光氨酸缺失BCYE-Cys平板上不生长。
2.血清学玻片凝集法
军团菌感染1周左右可检测出血清中军团菌特异性IgM抗体，2周左右可检测到特异性IgG抗体。
现已发现嗜肺军团菌有15个血清型。其中，嗜肺军团菌血清1型（Lp1）与人类疾病关系最密切，其次为血清4型（Lp4）和6型（Lp6）。
3.核酸扩增法
核酸扩增技术，即聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR），其基本原理是设计、合成两条寡核苷酸，作为引物，对应于待测病原微生物某一段特异性序列的两端，然后在体外模拟DNA体内复制的过程反复扩增，使靶序列放大上万倍甚至上百万倍而被检测出来。
常规PCR：鉴定标准是通过电泳来判断是否有扩增的核酸片段以及扩增产物的大小是否正确。(https://www.daowen.com)
实时荧光PCR：通过对实时荧光PCR反应的每一个循环产物进行荧光信号的实时监测来判断分析。
（四）检查
1.直接标本显微镜镜检（非荧光染色）
将肺组织和痰涂片进行镀银染色、吉姆萨（Gimenez）染色或革兰染色后，镜检观察嗜肺军团菌。
2.核酸检查
PCR与ELISA方法相结合检测军团菌，技术操作简单快速，也能确定军团菌属的各种细菌，为理想的诊断试验。
3.尿抗原检测
ELISA法对尿军团菌抗原进行检测，特异性、敏感性均很高，3 h内可获得结果。
4.细菌培养与鉴定
军团菌在活性炭-酵母浸液琼脂培养基（buffered charcoal-yeast extract agar，BCYE）上培养3～4 d可形成灰色菌落。大部分菌株不分解糖，动力阳性。临床常见军团菌菌种鉴别的关键性生化试验包括：马尿酸钠水解试验；荧光色素产生试验；明胶液化和氧化酶试验。其中嗜肺军团菌的生化特征：氧化酶（+＼-）、马尿酸钠（+）、明胶（+）、鞭毛（+）、荧光（-）。MALDI-TOF-MS技术也可以进行快速的初步鉴定。
5.血清军团菌抗体检测
确诊病人时，采急性期和恢复期双份血清，恢复期抗体滴度升高达急性期4倍或4倍以上，且滴度达1∶128时具有诊断意义（单管滴度≥1∶256，提示军团菌病）。
军团菌感染实验室检验流程如图10-8所示。
图10-8 军团菌感染实验室检验流程