实验八 外界因素对细菌的影响
一、实验目的
1.熟悉对单糖发酵分解产物的观察。
2.熟悉紫外线杀菌原理及特点。
3.掌握药物敏感实验的操作与判断。
二、实验原理
1.细菌的DNA吸收紫外线后，一条链上相邻的两个嘧啶通过共价键结合形成嘧啶二聚体，从而干扰了DNA的正常碱基配对，导致细菌死亡或变异。
2.根据G+和G-对抗生素和化学制剂的敏感性不一样，大多数G+对青霉素、红霉素等抗生素敏感，而多数G-对链霉素、氯霉素和庆大霉素敏感，临床上根据病原菌的革兰氏染色性，选择有效的药物治疗。
3.不同的糖对细菌的分解作用不同。
三、实验器材
1.菌种：葡萄球菌培养液，大肠埃希菌培养液。
2.培养基：琼脂平板培养基、葡萄糖、乳糖、果糖、麦芽糖等发酵管。
3.接种环、接种针、酒精灯、紫外灯、干燥药物滤纸片、镊子、无菌棉棒。
四、实验内容与方法
1.紫外线杀菌实验：紫外线对微生物有明显的致死作用，使细菌致死的紫外线的波长是200～300 nm，而以波长为265～266 nm的紫外线具有最高杀菌效应。经紫外线照射损伤的细胞，如立即暴露在可见光之下，则有一部分恢复活力，称为光复活现象。紫外线虽具有较强的杀菌力，但穿透能力不强，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线过滤，因此紫外线适用于表面灭菌和空气灭菌。
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2.药敏实验（纸片法）：
（1）取普通平板一个，用蜡笔在平板底部标记贴药敏纸片的位置。
（2）用无菌棉棒沾取菌液，在管壁上旋转挤压几次去掉多余的菌液，用无菌棉棒在培养基表面均匀涂布3次，每次将平板旋转60°，最后沿平板周围涂抹2圈，以保证涂布均匀。
（3）待干燥后，无菌操作用镊子取药敏纸片，按标记位置贴在涂布细菌的培养基表面，用镊尖压一下药敏纸片，一次贴好不得移动，纸片一贴上去就不可再拿起来，因纸片中的药物已扩散到琼脂中，每张纸片中心间距不少于24 mm，纸片中心距平板边缘距离不少于15 mm。直径为90 mm的平板最多贴6片。
（4）贴上纸片后，须在15分钟内置37℃培养箱内培养18～24小时后观察结果。
（5）结果报告，测量抑菌环（无细菌生长的环）的直径，结合药物的性质一般以敏感、中度敏感、耐药3个等级报告结果。（表1、图1）
表1 不同抗生素大肠埃希菌敏感程度
图1 药敏实验结果（对应书后彩图8）
表1药敏试验发现，氨苄西林、头孢唑林、头孢曲松、头孢噻肟对大肠埃希菌敏感性较好，在测定的6种药物中有青霉素、头孢他啶对大肠埃希菌中度敏感。判定标准参照《抗菌药物药效试验判定标准》。
四、注意事项
1.紫外线照射时人要离开。
2.药敏实验结果用直尺准确测量抑菌圈直径。