三、CD276与HER2在食管鳞癌细胞上的表达与分布
利用流式细胞术检测抗原在原代肿瘤细胞和肿瘤细胞系中的共表达情况。利用商品化的组织分离试剂和设备，将新鲜肿瘤组织制备成单细胞悬液，然后进行流式抗体染色与流式检测，并分析肿瘤细胞（CD45、α-SMA）中CD276与HER2的表达情况。
为了进一步验证能否针对CD276和HER2构建双靶点CAR-T细胞，我们利用流式细胞术分析了这15例组织（CD276与HER2均高表达）中的肿瘤细胞。结果显示，CD276与HER2在肿瘤细胞中的分布不完全一致，既存在单独表达，也存在共同表达的情况；重要的是，仅有约10%肿瘤细胞（5.3%～17.2%）不表达任何一种抗原（图16-11A），提示CD276与HER2可作为双特异性CAR-T细胞的较好靶点。对ESCC细胞系分析，发现CD276与HER2均高表达、且大多数细胞至少表达1种抗原（图16-11B），与原代肿瘤细胞检测结果一致，进一步说明靶向这两个抗原有望克服抗原丢失造成的肿瘤复发。
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图16-11 CD276 与HER2 在ESCC 原代肿瘤细胞和细胞系中的表达
A：ESCC患者来源的肿瘤组织制备单细胞悬液后，进行流式抗体标记，然后分析肿瘤细胞（CD45-α-SMA-）表面的CD276和HER2表达水平；B：流式抗体标记后，检测ESCC细胞系上抗原的表达水平， B细胞淋巴瘤细胞Raji作为阴性对照。
（李 峰）
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