10.2.4　杂交瘤细胞的克隆培养

由于筛选出的上清液为阳性的生长孔内常会含有两个以上的杂交瘤细胞集落。有的集落可能不分泌抗体，或分泌的不是所需抗体，有时也许只有其中的某一个集落是所需要的能够分泌特异性抗体的杂交瘤细胞。因此必须利用克隆培养方法及时把它们分开。最常用的杂交瘤克隆培养法是有限稀释法和软琼脂培养法。前者是将稀释到一定密度的杂交瘤细胞接种到96孔细胞培养板中，尽可能使每个孔中只有一个细胞生长；后者是利用软琼脂的半固体性质，使单个的杂交瘤细胞在相对固定的位置上增殖形成细胞克隆。(https://www.daowen.com)

克隆过程应及早进行，以避免无关克隆的过度生长。一旦克隆成功，应该对这一克隆细胞再连续克隆几次，并同时检测上清液中抗体的特性。如果原先有阳性抗体分泌，但克隆过程中未能发现阳性孔，可能是由于不分泌细胞或分泌无关抗体细胞过度生长，也可能是由于杂交瘤本身分泌表型不稳定。杂交瘤细胞是准四倍体，遗传性质不稳定，随着每次细胞的有丝分裂，都可能丢失个别或部分染色体，直到细胞呈现稳定状态为止。