5.兔肠利用
兔肠很长,其长度为体长的10倍左右,在医药工业上,可用兔肠作为提取肝素的原料。
(1)原料要求。肝素广泛分布于动物肠黏膜、肺、肝、血液中,在体内以蛋白质复合物的形式存在,取健康兔的新鲜肠黏膜为提取原料。
(2)提取方法。肝素提取方法,一般采用盐解→离子交换工艺或酶解→离子交换工艺,包括肝素蛋白质复合物的提取、分解和分离等三步,现以盐解→离子交换工艺为例,介绍提取工艺流程。
1)提取:取新鲜肠黏膜投入反应锅内,按原料量3%加入氯化钠,用氢氧化钠调节氢离子浓度至1纳摩/升(pH值9),逐步升温至50~55℃,保温2小时,继续升温至95℃,保温10分钟,随即冷却。
2)吸附:将上述提取液用30目双层纱布过滤,待冷却至50℃以下即加入714型强碱性树脂,树脂用量为提取液的2%,搅拌8小时后静置过夜。(https://www.daowen.com)
3)洗涤:虹吸除去上层液,收集树脂,用水冲洗至澄清、滤干。用2倍量1.4摩尔的氯化钠搅拌2小时,滤干。树脂再用1倍量1.4摩尔的氯化钠搅拌2小时,滤干。
4)洗脱:树脂再用2倍量3摩尔的氯化钠搅拌、洗脱8小时,滤干;再用1倍量3摩尔的氯化钠搅拌、洗脱2小时,滤干。
5)沉淀:合并滤液,加入等量95%的酒精,沉淀过夜,虹吸除去上清液,收集沉淀物,用丙酮脱水干燥,即得粗品。
6)精制:将粗品溶于15倍量的1%氯化钠溶液中,加6摩尔盐酸调节氢离子浓度至31.63毫摩/升(pH值1.5),过滤至清。随即用5摩尔氢氧化钠溶液调节氢离子浓度至0.01纳摩/升(pH值11),按3%加入30%过氧化氢溶液,25℃放置,24小时后再按1%加入过氧化氢溶液,调节氢离子浓度至0.01纳摩/升(pH值11),静置48小时,过滤,用6摩尔盐酸调节氢离子浓度至316.3纳摩/升(pH值6.5),加入等量的95%酒精沉淀。24小时后虹吸除去上清液,用丙酮脱水干燥,即得肝素钠精品。
(3)成品性质与规格。肝素为白色粉末,易溶于水,不溶于酒精、丙酮等有机溶剂。常用制品为注射剂。为延缓作用,提高效果,目前生产长效肝素注射液,一般封装于粉末安瓿中,临用前以注射用水溶解后供肌内注射。