母种培养基的形式及制备
（一）母种培养基的形式
由于培养目的不同，培养基的形式也不一样。固体培养基通常有下述三种形式。
1.斜面培养基 将琼脂培养基注入试管，经灭菌后放置成斜面即为斜面培养基。斜面培养基一般适用于母种扩大培养及菌种保藏。
2.平板培养基 将灭菌琼脂培养液倒入培养皿与三角烧瓶中，凝固后制成的培养基即为平板培养基。平板培养基用于菌种分离及菌类研究。
制备平板培养基是微生物工作中的一项基本操作技术，其方法是在酒精灯附近，右手拿住装有灭过菌的培养基的三角瓶，左手拔出棉塞后，转夹在右手小指与手掌间;左手拿住培养皿，拇指和食指抓住皿盖，小拇指和无名指托住皿底。将培养皿在酒精灯火焰旁打开，将培养基倒入培养皿中，盖好皿盖，摇匀放在平面上冷却即成。
3.高层培养基 将琼脂培养基注入试管内灭菌，直立制成的培养基即为高层培养基。这样接入菌种后，虽然发育的面小了一点，但培养基的厚度增大、营养丰富，时间长也不容易干燥、开裂。因此保存菌种常采用高层培养基。
（二）母种培养基的制作
为了保证培养基的质量，配制时要按照一定的操作步骤进行。应该选择合适的浸煮容器，一般可用玻璃缸、搪瓷缸或铝锅等。不能用铜、铁器皿，以免铜锈或铁锈混入培养基中。
1.计算 选好培养基配方，按需要培养基的数量计算各种成分的用量后称量。
2.称量 固体物的称量，要求准确。液体用量杯量。微量元素与生长元素需要量很小，难以称准，可先配成较浓的溶液，再取出需要的量。
3.配制 谷物、植物块茎等要先制浸出液。以配制马铃薯葡萄糖琼脂培养基为例说明如下：将选好的马铃薯洗净、去皮、挖去芽眼，切成薄片，称取200 g放入容器中，加水1 000 mL，加热煮沸15～20 min，至熟而不烂的程度，用4～8层纱布过滤，取其滤液，加水补足1 000 mL。此液为马铃薯煮汁。然后在煮汁中加入琼脂，小火加热，不断用玻璃棒搅拌，至琼脂全部溶化，再用纱布过滤1次，补水至1 000 mL，加入葡萄糖等其他物质，再煮几分钟，搅拌溶化，防止煳底或溢出。烧煳的培养基营养物质被破坏，而且容易产生对食用菌有害的物质，不宜再用。加热过程蒸发的水分应在最后补足。
在配制合成培养基的过程中，为避免生成沉淀造成营养的损失，要按顺序加入。先加缓冲化合物，溶解后加入主要元素，然后是微量元素，最后加入维生素、生长素等。最好是一种营养成分溶解后，再加入第二种营养成分。微量元素应配成母液，待其全部溶解后，再按用量加入培养基中;牛肉膏不易溶于冷水，可用热水溶化后加入;若有些物质难溶解，可通过加热等方法溶解后，再加入培养基中。如需使培养基清亮透明，可以将溶好的培养基用纱布趁热过滤。
玉米粉、蛋白胨等干粉类物质，先加入少量水调成糊状后再加入，防止结块。
琼脂的用量一般为2％，但生产中常根据季节变化和使用目的进行必要的调整。夏季气温高，试管内水分蒸发量大，为防止斜面脱水干裂，琼脂用量可减少到1.8％;冬季琼脂用量可增加到2.3％;孢子萌发时，琼脂用量可减少到1.6％～1.8％;进行菌种保藏时，琼脂用量可增加到2.5％。(https://www.daowen.com)
猴头等食用菌的最适pH值为4～5，此时琼脂难凝固，可将培养基营养成分和琼脂分开灭菌，然后在无菌条件下混合凝固。也可按照酸化培养基的制备方法制备酸化培养基。
4.酸碱度调节 一般用10％盐酸或10％氢氧化钠调pH值。用pH值试纸进行测试。调pH值时要小心，一滴一滴地加酸或碱，不要调得过酸或过碱，以避免某些营养成分被破坏。
在食用菌菌丝生长过程中，菌丝将碳水化合物分解成有机酸类，使培养基逐渐呈酸性;另外，有机酸类被同化后，培养基逐渐呈碱性。为防止培养基酸碱度出现大的波动，常在培养基中加入少量磷酸盐作为缓冲液。
5.分装 培养基配好后，趁热将其按需要分装于三角瓶或试管内，以免琼脂冷凝。温度低时，要保温分装。分装时应避免培养基黏附管口或瓶口。琼脂若黏着棉塞，会影响接种，还易引起杂菌滋生。分装用漏斗或橡胶管进行。装入三角瓶的培养基量，一般不要超过瓶容量的1/3;装入试管中的量，最好不要超过管长的1/5。
6.塞棉塞 分装后，塞好棉塞。做棉塞用普通棉花，不要用脱脂棉。棉塞的作用是既通气又过滤空气，避免杂菌污染培养基。
塞入试管的棉塞要紧贴管壁，不留缝隙，大小、松紧均匀适度。检查松紧的方法是：将棉塞提起，试管跟着被提起而不下滑，表明棉塞不松;将棉塞拔出，可听到有轻微的声音而不明显，表明棉塞不紧。
7.捆把 棉塞塞好后，每7支同样规格的试管包扎成1把，试管棉塞部分要包上一层牛皮纸或双层报纸，用绳捆扎在管壁或瓶颈上。包纸的作用是避免灭菌时冷凝水淋湿棉塞，并防止接种前培养基水分散失或被杂菌污染。
8.灭菌 试管包扎好后，放入铁丝筐中，竖直放入高压灭菌锅内灭菌。在压力升至0.05 MPa时排放冷空气，然后再在0.11 MPa下灭菌20～30 min。灭菌时间不能过长，否则易破坏培养基的营养成分，使酸度增加、凝固不良。灭菌后待温度缓慢降到60℃时再摆成斜面，以防冷凝水在管内积聚过多。
9.摆斜面 摆放方法是将1 cm厚的木板或钢板平放于平台或地上，然后将灭过菌的试管口朝上摆放于板上冷却凝固即成斜面培养基。摆放后在试管上覆盖棉布保温也可减少冷凝水过多。斜面长度占试管总长的1/2，最多不超过3/5。
（三）酸化培养基的制备
如果灭菌前将培养基pH值调至4以下，则灭菌后琼脂不凝固。制备酸化培养基除适当增加琼脂用量外，还应该在灭菌后酸化：将灭菌后的试管移到无菌室内，用灭菌吸管吸取事先单独灭过菌的0.5％的柠檬酸液，加入试管内数滴，用精密试纸检查，确定加入量，在试管内进行酸化;如制备量较大，可以将培养基装入三角瓶灭菌后酸化，再装入灭过菌的空试管。
（四）平板培养基的制备
如制三角瓶平板，将培养基装入三角瓶内灭菌、冷却后即成;如制培养皿平板，将灭过菌的三角瓶中的培养基，按15～20 mL的量倒入无菌培养皿中，放平，凝固后即成平板培养基。一般现用现倒。
