母种的扩大繁殖
初次分离或引进的母种常需要进行扩大繁殖。扩大繁殖时要进行接种。接种是食用菌生产中的一项最基本的操作，无论是纯菌种的分离、鉴定，还是食用菌的科研及菌种的扩大繁殖，都必须进行接种。接种的关键在于严格的无菌操作。在无菌室或接种箱内燃烧的酒精灯火焰旁进行无菌接种的技术，叫做无菌接种技术。根据菌种的不同繁殖时期可分为母种接种、原种接种及栽培种接种。
（一）母种接种
母种接种是把试管菌种或培养皿菌种转入试管斜面上的过程。这种方法常常用于母种的扩大繁殖。一般对初次分离获得的母种或从其他单位引进的母种要进行扩大繁殖。选择菌丝粗壮、生长旺盛、颜色纯正、无杂菌感染的试管母种，进行2～3次转管，以增加母种数量。
1.接种前的准备 接种前要准备好接种工具。接种工具常因工作对象和接种方法不同而不同。
接种前还要对接种箱进行消毒，接种箱在使用前要打扫干净。然后将灭过菌的试管和接种工具放入接种箱中，用甲醛和高锰酸钾灭菌30 min。也可用气雾消毒剂熏蒸30 min。装有紫外线灯的，在灭菌的同时用紫外线灯照射。用超净工作台接种的，先开紫外线灯照射20 min，再打开风机吹30 min，然后再打开照明灯开始接种。
接种前应严格检查菌种是否遭受污染。尽量不要将接种材料（母种或分离材料）先放入接种箱中与待接斜面一起灭菌，以免损坏菌种。
2.接种方法 接种要在接种箱或超净工作台内严格按照无菌操作规程操作。接种前，先用肥皂水或2％来苏儿洗手，再用75％酒精擦拭双手、接种工具和试管表面。即先进行表面消毒，再开始接种。
（1）点燃酒精灯。酒精灯火焰周围的空间为无菌区。利用酒精灯火焰接种可以避免杂菌污染。
（2）将菌种和斜面培养基的两支试管用大拇指和其他四指平握在左手中，使中指位于两试管间的空隙，斜面向上，并使它们处于水平位置。
（3）先将棉塞用右手拧转松动，以利于接种时拔出。
（4）右手拿接种钩，拿的方法如同握笔，在火焰上进行灼烧灭菌。凡在接种时进入试管的部分均应在火焰上灼烧。
（5）用右手掌根、小指、无名指同时拔掉两个试管的棉塞，并用手指夹紧，切勿放于工作台上，更不能放在未经灭菌的物品上。(https://www.daowen.com)
（6）以火焰灼烧试管口，灼烧时不断转动管口（靠手腕动作），烧死管口上可能附着的杂菌。
（7）将灼烧过的接种钩伸入菌种管内，先使其冷却，以免烫死菌丝。去除气生菌丝再轻轻挑取少许菌丝，迅速移入待接的试管斜面中央，轻压防止接种块滑动。注意不要把培养基划破，也不要把菌丝粘在管壁上。
（8）抽出接种钩，灼烧管口，再将棉塞塞上。塞棉塞时，不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。（5）至（8）的操作都要保持试管口在火焰的无菌区内（5 cm以内）。
（9）如此反复操作，1支母种一般可扩20～50支试管。
（10）试管从无菌室或无菌箱取出时，应逐支塞紧棉塞，在试管上贴标签，注明接种日期、菌种编号、转管次数及操作者姓名等。然后在暗光下进行适温培养。
（二）银耳菌种的混合培养
人工培养的银耳菌种必须是银耳菌丝和香灰菌丝的混合体。银耳菌丝和香灰菌丝是分别保存的，只在使用前再进行混合。银耳和香灰菌丝有严格的亲和性，不同品系之间共生的双方都不能掉换。即使是同一品系，不同产地、寄主掉换后，也不能很好地配对。最好是将在同一材料上分离的银耳和香灰菌丝进行混合。银耳母种混合后，直接接种到原种上，一般不再进行扩大培养。
1.在琼脂培养基上进行混合培养 如果用银耳菌丝进行混合培养，应将银耳菌丝连同少量培养基一起移接琼脂斜面上，置23～25℃培养5～7 d。当银耳菌落直径超过1 cm时，在菌落前面或后面接少许香灰菌丝，在相同温度下培养7～10 d，待香灰菌丝长满斜面时即为混合母种;也可先在斜面接种菌龄短的原基组织、原基块上的绒毛或纤细的银耳次生菌丝，待银耳菌丝长到玉米粒大时，再在距其0.5 cm处，接种一小块香灰菌丝。选“白毛团”长势好、吐黄水的试管作母种用。此法培养的银耳母种常用于袋栽;用芽孢进行混合培养;先接芽孢，待芽孢萌发形成银耳菌丝后，再接香灰菌丝。此法培养的银耳母种常用作段木栽培。
进行混合培养时一定要注意接种的顺序，即银耳菌丝或芽孢接种在前，香灰菌丝接种在后。先接银耳菌丝可以保证其在混合培养中的相对优势。如果先接香灰菌丝，就会影响到银耳菌丝的定植和发育。尤其是制作袋栽菌种时，更要注意这个问题。
2.在木屑培养基上进行混合培养 将已经萌发的芽孢菌落或银耳菌丝连同培养基接入木屑培养基上。因为银耳菌丝不能分解纤维素，所以要同时接入香灰菌丝，在25℃下培养。当香灰菌丝长到瓶底，银耳菌丝已形成“白毛团”并开始胶质化时，根据银耳菌丝的生理成熟程度，决定作母种或原种使用。福建省应用比较多的是提前3 d将香灰菌丝接种到木屑培养基上，然后再从菌龄22 d左右的原种瓶中挑取银耳菌丝（白毛团）接种，在22～24℃培养15～20 d，即可作为母种使用。
3.直接用芽孢进行混合培养 将香灰菌丝接种到木屑培养基上，在25～28℃培养，待菌丝长到瓶底时，用接种环挑取芽孢在木屑培养基表面进行划线接种。25℃培养10～15 d，银耳菌丝开始萌发，并逐渐胶质化形成子实体原基;也可将无菌水倒入芽孢试管中，制成芽孢悬浮液，再用接种针在木屑培养基内打孔，直达底部。可以多打几个孔，分布要均匀。将少量芽孢悬浮液倒入菌种瓶内，使其从孔内自动渗到培养基的内部。然后放在25℃下培养7～10 d，即可作为母种使用。前一种方法，银耳菌丝集中在表面，生理成熟度较高，适宜作袋栽菌种使用;后一种方法，银耳菌丝在培养基内，生理成熟度较低，适宜作段木栽培菌种。
