短受精检查标准化操作流程
短受精检查,主要目的是观察受精卵的卵子活化(以第二极体的排出为标志)情况,短受精观察的主要目的是当常规受精情况不理想时更早地补救ICSI从而获得良好的受精结局,在进行短受精观察前需剥除卵母细胞外的颗粒细胞。
1.剥卵操作流程:
(1)在37℃培养箱中预热可能需要使用的透明质酸酶溶液、箱外操作液及矿物油。
(2)操作环境:百级净化工作台中操作,配备温度37℃加热板的体视镜和倒置显微镜下观察。
(3)用剥卵针剥离“受精卵”外层卵丘细胞,剥卵针内径约为135μm。
(4)物理吹打剥卵:需先剥除外层卵丘细胞,使用剥卵针可用受精培养液润洗。体视镜下,用剥卵针在受精皿吹吐“受精卵”,剥离“受精卵”外层卵丘细胞。开始时,先剥离一个“受精卵”,如顺利,之后可以3～4个受精卵一起剥离。
(5)如物理方法剥离颗粒细胞效果欠佳,可进行酶消化处理剥除卵母细胞,具体操作方式如下(参见前面图5.7):
①取出预热好的透明质酸酶及箱外操作液。
②制备剥卵皿:取100mm培养皿,制作150μL左右透明质酸酶微滴,在其下方制作若干50μL箱外操作液滴。
③盖5～6mL矿物油放置在37℃恒温工作台上备用。
④采用连续移液剥离周围卵丘细胞时,卵母细胞置于透明质酸酶溶液中不超过30s。(https://www.daowen.com)
⑤立即采用最小体积的溶液(尽可能去除卵丘细胞)移除卵母细胞并转移至箱外操作液。采用移液管抽吸卵母细胞以移除剩余卵丘细胞和冠细胞。
⑥洗涤剥离的卵母细胞2次以上直至完全剥离。
2.短时受精效果观察:
(1)剥离颗粒细胞后,使用拉制的巴斯德吸管将受精卵转入备好的卵裂胚培养皿内。
(2)根据标号记录每个受精卵第二极体排出的情况,计算受精率,加精4h,如未达到成熟卵母细胞30%,可继续每半小时统计一次直至加精后8h。
3.短时受精情况的判读:此时以第二极体排出——卵子活化为标志,在《胚胎培养记录》中记录每个卵子的2PB的排出情况。截至加精后8h观察并统计极体排出情况。
(1)若双极体数量大于或等于成熟卵的30%,则不做特殊处理。
(2)加精6h后若双极体数量小于成熟卵的30%,则考虑对未见双极体的成熟卵母细胞行补救ICSI。
(3)如加精8h后第二极体排出比例低于50%时可视为卵子活化完全失败,可以实施补救ICSI。如实施补救ICSI,则应记录具体操作的卵母细胞补救时分期(MII期卵子方可实施补救ICSI)。
(4)如决定进行补救ICSI,应填写《补救ICSI知情同意书》转交护理并与患者沟通签署该知情同意书,并通知收取ICSI费用。
