捡卵标准化操作流程
1.捡卵前准备工作:
(1)在平衡好的卵泡冲洗液10mL/离心管中加入肝素(终浓度10IU/mL),混匀后将液体传入手术室供手术人员冲洗取卵针和卵泡。
(2)将存放于4℃冰箱中的分装1.5mL含蛋白的箱外操作液的5mL离心管取出,放置于导热试管架上预热至37℃,备用。
(3)准备10cm培养皿若干,用于倒入卵泡液寻找卵冠丘复合体(oocyte-coronacunulus comples,OCCC)。
(4)将放入37℃,6%CO2培养箱中平衡过夜的35mm培养皿和中央井培养皿放在培养箱中备用。
(5)每位患者准备两支1mL空针和两块无菌纱布(用于临时擦拭泄漏的液体)。
2.捡卵操作流程:
(1)手术开始前,实验室人员与患者、取卵医师及护士再次核对患者夫妇姓名,并在该患者的《胚胎体外培养记录表》上登记手术开始时间。
(2)手术室医师将卵泡液吸出后给予取卵室护士再由护士,确认患者双方姓名后与实验室取卵岗工作人员进行核对,再经传递窗将卵泡液交给取卵岗操作员,取卵岗工作人员记录卵泡液体积后将卵泡液倒入10cm培养皿(培养皿中卵泡液厚度不应超过0.5cm)。
(3)使用巴斯德吸管在体视显微镜下“快速”寻找3～5mm的透明黏液团(即为卵冠丘复合体),发现OCCC后即刻通知取卵医师,每次捡到OCCC后与助手配合在捡卵记录中根据卵母细胞形态分别进行记录,具体分级原则为:
I级(成熟):具有完全扩展的卵丘细胞完全分散的放射冠,卵母细胞有清晰的透明带,胞质均匀,第一极体已排出。
II级(近成熟):具有完全扩展的卵丘细胞,轻度紧密的放射冠。(https://www.daowen.com)
III级(未成熟):卵丘细胞位扩展,放射冠细胞排列紧密,卵胞质中可看到生发泡,膜颗粒细胞紧密。
IV级(过熟):扩展的卵丘细胞呈簇状排列,放射冠很分散,常呈簇状不规则或不完整,卵胞质颗粒化或发暗。
V级(闭锁):无卵丘细胞,如有放射冠细胞,多呈簇状或非常不规则,卵胞质轻度发暗或不呈均质状。
(4)此时OCCC编号仅为OCCC分别评价及计数所用,可能无法与胚胎单独培养相对应,且因尚未剥卵一般无法评价卵母细胞质内状况。
(5)结束后将寻找到的OCCCs收集计数后放入事先准备的含有箱外操作液的5mL离心管中暂时保存。
(6)箱外操作液中的OCCCs一般会沉入管底,将准备好的新巴斯德管插入管底吸取OCCCs移入事先平衡好的2mL受精液的35mm培养皿(实验室人员称其为“洗卵皿”),在“洗卵皿”不同位置轻柔地吹吸OCCCs对其进行清洗,重复3～5遍(目的是尽量去除箱外操作液及残余红细胞),如红细胞较多时可利用提前备用的1mL注射器针尖进行初步剥离。
(7)使用巴斯德管将卵母细胞从“洗卵皿”中转移到中央井培养皿外圈的液滴不同位置,轻柔地吹吸OCCCs对其进行清洗,重复3～5遍,其后将OCCCs放入中央培养孔中培养。之后将剩余的箱外操作液倒入“洗卵皿”检查是否有遗漏的OCCC。将该患者培养的OCCCs数目(获卵数)进行记录并反馈给取卵医师。
3.注意事项:
(1)对于卵泡少(2个以下)或出卵困难(单侧卵巢3次穿刺仍未出卵)的患者,如未取到卵,应在找卵皿中保留卵泡液,经两人核对确认后告知手术医师。
(2)收集卵过程中,如发生特殊情况(如囊肿穿刺、巧克力囊肿等),应保留相应卵泡液,留到最后找卵。为避免污染,该卵应单独放置,并在记录单上标明。提醒实验室后续处理过程要注意观察及做相应处理。
(3)取卵时,上一患者的器皿未清理好时,绝对不得接收下一患者的卵泡液。
