实训6　微生物细胞形态的观察（三）——微生物细胞大小的测量

一、实训目的

了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法。

二、实训原理

微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一。菌体微小，只能在显微镜下测量，用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。

目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等份，或把10mm长度刻成100等份。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中间物像重叠），用于测量经显微镜放大后的细胞物像（图3－7）。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此用目镜测微尺测量微生物大小时须先用绝对长度的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

图3－7　目镜测微尺（a）及镜台测微尺（b）的安装方法

镜台测微尺（图3－8）是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10μm（即0．01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。

图3－8　镜台测微尺（a）及刻度放大（b）

三、实验器材

1．菌种

酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面菌种，枯草芽孢杆菌染色制片。

2．器具

显微镜，目镜测微尺，镜台测微尺，盖玻片，载玻片，滴管，双层瓶，擦镜纸等。

四、实训步骤

1．目镜测微尺的校正

把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图3－9），数出两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。因为镜台测微尺的刻度每格长10μm，所以由下式可以算出目镜测微尺每格所代表的实际长度：

目镜测微尺每格长度（μm）＝两重合线间镜台测微尺格数×

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图3－9　校正时镜台测微尺与目镜测微尺的重合情况

例如，目镜测微尺60小格正好与镜台测微尺10小格重合，已知镜台测微尺每小格为10μm，则目镜测微尺上每小格长度＝10×10／60＝5／3μm。

用同法分别校正在高倍镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。

由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在该显微镜上重复使用，当更换不同显微镜目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。

2．菌体大小的测定

目镜测微尺校正完毕后，移去镜台测微尺，换上菌体染色制片（当测定酵母菌细胞大小时，先将酵母培养物制成水浸片），调整焦距，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜（测细菌大小则用油镜）下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长、宽各占几格（不足一格的部分估读到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。一般测量菌体的大小要在同一个标本片上测定10～20个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。待测微生物需用培养至对数生长期的菌体进行测定。

五、结果记录

将实训结果填入表3－2至表3－4。

表3－2　目镜测微尺校正结果