实训13　微生物群体形态的观察（五）——根霉接合孢子的形成和观察

实训13　微生物群体形态的观察（五）——根霉接合孢子的形成和观察

一、实训目的

了解霉菌产生接合孢子的形态，学习接合孢子的培养和观察方法。

二、实训原理

接合孢子是霉菌的一种有性子孢子，由两条不同性别的菌丝特化的配子囊接合而成，有的为同宗配合，有的为异宗配合。黑根霉（又名匍枝根霉）、蓝色梨头霉的接合孢子都属于异宗配合，将它们的两种不同性别的菌株（分别记为“＋”和“－”）接种于同一琼脂平板中，经一定时间培养后，即可形成接合孢子。

三、实训器材

1．菌种

黑根霉“＋”（As3．2045）、“－”（As3．2046）PDA斜面菌株各1支。

2．培养基

PDA培养基。

3．试剂与染色液

乳酸石炭酸棉蓝染液，生理盐水，50%酒精。

4．器具

显微镜，酒精灯，无菌培养皿，载玻片，盖玻片，镊子，解剖针，接种环。

图3－15　根霉接种示意图

四、实训步骤

1．倒平板(https://www.daowen.com)

将已熔化并冷却至50℃左右的PDA培养基倒入无菌培养皿约20mL，倒两个平板，待凝固后接种。

2．接种与培养用

接种环挑取黑根霉“＋”菌株的菌丝少许，在平板左侧斜划线接种，烧环后再挑取“－”菌株的菌丝在平板右侧斜划线接种（图3－15）。注意两菌之间的接种线应有一定距离，并呈“八”字形。同时做一个接种同类菌株作对比实验的平板。将平板倒置于28～30℃培养2～4天观察。

3．制水封片与观察

向载玻片上加1滴生理盐水或乳酸石炭酸棉蓝染液，用解剖针或镊子挑取“＋”、“－”菌丝间的菌丝少许，用50%酒精浸润并用水洗涤后放于其中，小心分散菌丝，加盖玻片后，依次在低倍镜和高倍镜下观察不同生长时期的接合孢子和配子囊的形状。亦可不制作水封片，直接将平板置于低倍镜下观察两菌株接触部位生成接合孢子的情况。接合孢子的形成如图3－16所示。

图3－16　根霉接合孢子形成示意图

（a）培养2天后，“＋”、“－”菌株相邻近的菌丝各自向对方伸出极短的侧枝；

（b）两菌株的侧枝互相接触，顶端各自膨大，形成两个原配子囊；

（c）每个原配子囊产生横隔，将每个短枝分为两部分，横隔前部为配子囊；

（d）配子囊在接触后中间隔膜消失，随之两菌株的细胞质与细胞核相融合成为原接合孢子；

（e）原接合孢子中央膨大呈囊，囊壁加厚，此时即为接合孢子

五、结果记录

绘出黑根霉接合子孢子形态图，并注明原配子囊、配子囊、接合孢子的名称。

六、思考题

在接种异类和同类菌株的平板中，哪种情况能在接种带的中间看到一条深色的接合孢子带？如果不明显，可通过透射光观察。