泪液的一般检查
一、泪液标本的采集与处理
一般认为泪液成分的浓度测定结果受标本采集方法的影响。鉴于泪液分泌量少,可以用机械法或化学物质刺激结膜或鼻黏膜增加泪液分泌,使标本量及某些由泪腺分泌产生的物质量增加,便于对泪液进行分析;但是刺激使泪液分泌增加,势必造成泪液某些成分的稀释,对稀释的程度又很难控制。所以目前多用特制毛细管或滤纸取样法,以采集无刺激标本。
1.毛细管采集法
用直径0.3~0.5mm的特制聚乙烯塑料毛细管置于下穹隆部结膜囊,利用其虹吸作用采泪约5min,可得泪液标本约5μl。本法采集标本为无刺激泪。
2.滤纸片吸附法
用定量分析用的小滤纸条、圆形或方形滤纸片(常用直径为5mm的小圆纸片),称重消毒后,将其放入受检者下穹隆结膜囊,待纸片被泪液饱和后取出称重。根据泪液的密度(常以1.005计)计算所获取泪液的量(一般每片纸可获2.5~3.5μl泪液),最后用缓冲液稀释洗脱,取洗脱液供分析或密封冷藏备检。也有人用干燥灭菌的小纤维素海绵块、棉花球或棉花条代替滤纸取样。
3.细管直接采集法
用注射器、钝针头或吸量管在内眦角、下泪湖或下穹隆结膜囊抽吸眼泪,这种方法采集的泪液样本为刺激反射泪。
4.刺激采集泪液法
采前于下眼睑皮肤上涂少许清凉油、酒精或其他刺激性物质或针刺穴位等方法,待出现反射泪液后用毛细管在外眦部吸取泪液。这种方法可采集的泪液量较多,以供多项试验用;还适用于分析由泪腺所分泌的物质。
最近Jones等人研究采用一种称为多孔聚酯杆(porous polyesterrods)方法收集泪液标本,通过对所收集标本中某些物质分析表明,该方法比毛细管采集法速度快近4倍,且增加了泪液成分的回收,分析的准确性和重复性高,可以用这种快速、方便、可靠的方法代替毛细管采集法,使泪液分析更广泛应用于临床工作。
二、泪液的外观
正常人的泪液为无色、无味、透明的液体,在病理情况下可出现异常变化。角结膜、泪结膜、泪腺感染时,其炎性分泌物进入泪液,呈现不同程度的浑浊甚至呈黏液脓性。血性泪液可见于结膜炎、泪囊和泪腺肿瘤等。(https://www.daowen.com)
三、泪液的p H测定
泪液p H常用精密p H试纸测定;也可直接将微电极放置于下穹隆部测定,结果较准确;或在微型p H测定器、精密的气体酸碱分稀仪上进行测定。在仪器上进行测定时,须注意标本不能与空气接触过久,否则测定的结果有偏差。
正常人泪液略偏碱,p H变动范围在6.4~7.7之间,长时间闭睑后酸移;泪液的p H有一定的日间变化规律,上午低,午后逐渐增高,晚间又恢复到原水平;老年人泪液的p H偏高,此时溶菌酶活性降低,易于细菌生长,所以老年人易患干眼症和结膜炎。干性角膜炎、角膜外伤、春季卡他性结膜炎及我国高原居民泪液p H碱移;而沙眼和细菌性结膜炎患者的泪液p H不增高。有研究发现泪液p H与视力低下有一定关系,呈现出视力越低泪液p H越偏酸的趋势。
四、泪液细胞学检查
(一)泪液涂片细胞检查
正常人泪液直接涂片镜检或用瑞氏染色后分类计数,细胞常为阴性或可见少量白细胞,偶见脱落的上皮细胞。细胞较少时可将标本置于小口径的玻片离心沉淀器内,低速离心后镜检。
化脓性结膜炎泪液涂片(常因分泌物较多,泪液与结膜分泌物混在一起)可见大量中性核粒细胞和上皮细胞;出血性结膜炎时可见大量红细胞;过敏性结膜炎和寄生虫感染时可见嗜酸粒细胞增多;斯耶格伦(Sjgern)综合征和泪腺裂头蚴病的泪腺有淋巴和浆细胞浸润,泪液中也可见淋巴细胞增多。另外,感染结膜吮吸虫患者泪液涂片可见虫卵,偶见幼虫;眼蝇蛆病感染者的泪液可检出蝇卵。
(二)上皮细胞活体染色
上皮细胞活体染色是诊断眼表疾病(尤其是干眼症)的有效方法,上皮的一些细微变化只有在活体染色中才能被发现。常用的染科为虎红和荧光素钠,染料滴眼半小时内,于裂隙灯下检查;也可用丽丝胺绿、澳新蓝、四氮唑红、台盼蓝等染料,但所染组织性质和颜色各不相同。
正常角膜各种染料均不着色。虎红主要着染已死亡或变性的细胞,以及那些缺乏表面蛋白,尤其是黏蛋白覆盖的细胞和黏液,着色为红色。Pflugfelder研究发现,各种疾病所致的杯状细胞密度降低,黏液上皮细胞减少,使角膜表面黏蛋白缺乏,均可使虎红着色,显示虎红对探查泪膜黏蛋白的完整性是优越的,是早期诊断干眼病较敏感的染色方法。判断标准为:染色点≤4为(+),40~50点或见于中下部角膜为(++),≥51点获见于全部角膜为(+++)。虎红着色增加,对KCS具有重要的诊断价值,也是早期诊断原发性SS的敏感、特异的方法之一。在神经营养性角膜炎中,泪液分泌减少,角膜上皮细胞受损,使虎红着色显著增加。在各种干眼症中,虎红染色与泪液乳铁蛋白水平存在负相关的关系。荧光素绿染上皮细胞破损处,与虎红不同的是荧光素无毒性刺激,且可经角膜基质扩散,只要有细胞与细胞之间连接的破坏即可着色,但是虎红较荧光素对干眼症的诊断有强特异性。有人提出用虎红和荧光素混合双重染色,可同时获得泪膜破裂时间、失活得上皮细胞和商品缺损等三方面资料,可作为眼表细微异常的常规检查。丽丝胺绿着染退变上皮和黏液,诊断价值同虎红,但无刺激性。奥新蓝染黏液为深蓝色,四氮唑红染退变上皮,台盼蓝染死亡上皮,均可用于诊断。
(三)角膜棉拭子涂片细胞检查
用棉拭子擦拭角膜后制作涂片染色镜检,正常涂片中可见杯状上皮细胞和白细胞。KCS患者的涂片中可见角化上皮细胞、杯状上皮细胞和大量黏液丝;晚期可见杆菌,上皮细胞破坏,杯状细胞消失。涂片Giemsa染色,结膜炎患者的上皮细胞内有时可见蓝色包涵体,可能为受损伤的上皮细胞,应与沙眼衣原体包涵体相鉴别。