5.2.8　RT-PCR技术

RT-PCR（Reverse Transcrip tion-Polymerase Chain Reaction）是将RNA的反转录（RT）和cDNA的聚合酶链式扩增相结合的技术。PCR技术不仅可以用来扩增DNA模板，而且同样也可以用来扩增被反转录成cDNA形式的RNA序列。这需要在mRNA反转录之后进行PCR扩增，称之为RT-PCR。它既是一种检测RNA分子的良好方法，也是获取测序用的模板DNA的有效手段，同时还是克隆m RNA的cDNA拷贝的重要步骤。

RT-PCR具有高度敏感性，可用于分析不同组织或相同组织的不同发育阶段中m RNA表达的相关性。一般来说，细胞中某种mRNA的数量是其编码基因活性的直接反映，所以某种mRNA的定量是随着在不同的时空状态下编码基因表达活性的变化而不同的。过去，这种m RNA的定量测定是应用RNA提取物的Northern杂交进行的。但这种方法只能检测含量丰富的m RNA样品，而对于那些含量稀少的mRNA样品则无能为力。由于RT-PCR的敏感性，它可用来研究低表达活性基因的m RNA生理变化动态情况，而这类基因往往又是人们感兴趣的重要基因。