第二节　连接酶

基因工程的核心是DNA重组技术，而DNA重组技术则体现于异源DNA分子之间的连接。由此可见DNA分子间的连接反应在基因工程中的地位。DNA连接酶具有修复单链和双链，催化DNA分子连接的能力，其作用位点是DNA相邻核苷酸的3′羟基和5′磷酸间形成共价的磷酸二酯键，使原先断裂的DNA连接起来。

体外进行DNA片段连接反应的实验方法可分为四大类：第一类是黏性末端DNA片段的连接，用DNA连接酶连接具有互补黏性末端的DNA片段；第二类是平末端DNA片段的直接连接，用T4 DNA连接酶直接将平末端的DNA片段连接起来；第三类是多聚脱氧核苷酸接尾连接，用末端脱氧核苷酸转移酶给平末端DNA片段加上多聚脱氧核苷酸尾巴后，再用DNA连接酶将它们连接起来；第四类是接头连接，在平端DNA片段末端加上化学合成的接头（linker）而形成黏性末端，再用DNA连接酶将各黏性末端DNA片段连接起来。这四种方法的共同点是：利用DNA连接酶的连接和封闭单链DNA的功能将DNA链连接起来。