3　讨论

本研究通过对14种蛹拟青霉菌株的液体发酵培养，检测发酵液与菌丝体中的虫草素的产量，比较得出CM001号与10号菌株是液体发酵培养高产虫草素的优良菌株。

初级代谢产物的产量往往与生物量呈正相关，而次级代谢产物的积累不一定与生物量呈正相关。虫草素作为北冬虫夏草的次级代谢产物，本试验通过在发酵液及菌丝体不同生长时期测定其中虫草素含量的结果发现，菌丝体大量合成时，培养液体中虫草素含量一直处于较低水平，而在营养成分大部分耗尽的10d后虫草素大量合成，并且在培养基中大量积累，这与刘艳芳等(2010)的研究结果一致。但随着时间的延长，在虫草菌生物量的衰退期，虫草素也有少量增加，但是增加量也不到总产量的1%，这与罗巍等(2011)的研究一致，而且做为次级代谢产物，70%以上的虫草素都分布在发酵液中。本研究通过对蛹虫草CM001号菌株的液体发酵培养，并最终确定了以虫草素为生产目的的液体发酵的最佳发酵周期为13d。(https://www.daowen.com)

通过对蛹虫草10号、CM001号菌株进行液体培养，比较研究了不同营养添加物对虫草素产量的影响，添加腺嘌呤、丙氨酸、腺苷、L-天冬氨酸、甘氨酸5种前体均能提高蛹虫草液体发酵胞内外虫草素的产量，特别是添加1g/L的腺嘌呤能大幅提高胞外虫草素产量，蛹虫草10号的虫草素总产量提高7.09倍。营养添加物研究发现腺嘌呤与腺苷均能提高虫草素产量，这两种化合物在虫草素的合成中所发挥的作用基本相同，而细胞利用腺嘌呤的速度比腺苷的速度快，且在同样的添加浓度下，腺嘌呤更有利于虫草素的合成，对虫草素产量的提高更显著。文庭池等(2009)证实，腺苷、腺嘌呤对虫草素的含量有促进作用，这与本试验结果一致。而Mina et al.(2006；2007)研究表明，添加腺嘌呤和腺苷的混合添加物，并进行循环加入液体培养基能提高虫草素产量5.5倍，而本试验只是加入1g/L的腺嘌呤就能使虫草素产量提高到7.09倍，这可能与蛹虫草人工培养存在的菌株差异，区域差异、培养条件差异及提取条件的不同有关(杨昕等2009)，导致其中的虫草素含量存在差异。在本研究中，丙氨酸、L-天冬氨酸、甘氨酸对蛹虫草中虫草素合成的促进作用较明显；这可能由于这两种氨基酸类物种作为一种营养物质，能影响腺苷、腺嘌呤和虫草菌素的生物合成；而鸟苷，肌苷，半胱氨酸均不能提高虫草素产量，反而对虫草素的合成有抑制作用。