尿液清蛋白定量测定
清蛋白(albumin,Alb)是血浆蛋白的主要成分。在血浆中清蛋白带负电荷,少量通过肾小球,主要由近曲小管重吸收,尿液中含量极微(为5~30mg/24h)。早期的肾小球病变,清蛋白排泄率即有所增加,但因未达到100mg/L或150mg/24h,常规定性方法尚不能检出,只有通过更敏感的方法才可检测到尿液中清蛋白的含量的变化,因而曾于1982年被Viberti命名为微量清蛋白(microalbumin,MAlb),以区别于普通的尿蛋白,但实质上它仍是尿蛋白的一部分,只是该指标的早期变化能更加敏感的反映肾小球功能的损害。
(六)检测原理
1.溴甲酚绿法 血清清蛋白在pH4.2的缓冲液中带正电荷,在有非离子型表面活性剂存在时,可与带负电荷的染料溴甲酚绿结合形成蓝绿色复合物,在波长630nm处有吸收峰,其颜色深浅与清蛋白浓度呈正比例,与同样处理的清蛋白标准比较,可求得血清中清蛋白含量。
2.放射免疫法(RIA) 以放射性核素标记的抗原与反应体系中未标记的抗原竞争结合特异性抗体为基本原理来测定待检样品中抗原量的一种分析法。
3.酶联免疫法(ELISA) 先使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性,然后使抗原或抗体与某种酶连接成酶标记抗原或抗体。加入酶反应底物后,底物被酶催化变为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量呈正比,故可根据颜色反应的深浅进行定性或定量分析。
4.免疫比浊法 抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物,反应液出现浊度。当保持反应液抗体过量时,形成的复合物随抗原量增高而增高,反应液浊度也随着增高,其结果与一系列标准品对照,即可计算出受检物的含量。
(七)方法学评价(表2-26)。
表2-26 尿液清蛋白测定的方法学评价

(八)参考区间
1.晨尿 5.1~6.5mg/L;(https://www.daowen.com)
2.随机尿 (1.27±0.78)mg/mmolCr或(11.21±6.93)mg/gCr。
(九)质量保证
1.检测前 ①标本留取:由于方法不同可留取晨尿、随机尿或24小时尿,留取24小时尿时容器加盖,4℃存放,必要时加防腐剂。②注意非特异性浊度的控制:标本需经过离心后测定,以除去尿液中有形成分及不溶性杂质,容器及所用实验器材要清洁干燥,抗血清宜在4℃保存,防止被其他杂质污染,更不可反复冻融。③剧烈运动后尿液中清蛋白排出量可增高,宜收集清晨或安静状态下的尿液。④嘱患者正常饮食。
2.检测中 ①注意抗原抗体的比例:检查前最好先进行蛋白定性或半定量,或利用仪器的自检功能,对蛋白含量较高者给予适当稀释。②严格控制反应时间。③注意试剂在有效期内使用,每次更换试剂后应重新制作标准曲线。
3.检测后 根据检测方法和所用尿标本类型不同,报告方式也不同。①晨尿法:报告每升尿排出量(mg/L)。②定时留尿法:计算单位时间内的排泄率(mg/24h),推荐以24小时尿清蛋白总量,即尿清蛋白排泄率(urin albumin excretion rate,UAE)表示。③随机尿法:采用随机尿测定MAlb,同时测定尿肌酐,用肌酐比值报告排除率(mg/mmolCr或mg/gCr),基本上反映了患者在生理状态下肾脏排出尿蛋白的情况,剔除了晨尿所致的尿液浓缩因素,并可进行快速测定。
(十)临床意义
肾小球发生病变可使清蛋白滤过增加,肾小管受损影响蛋白质重吸收也会出现清蛋白排泄率升高。
1.早期肾损害的筛检 糖尿病、高血压、重金属及药物中毒性肾病,清蛋白排泄率的增加可出现于其他指标变化之前,定期监测有助于早期发现肾脏损害。
2.过敏性紫癜的肾功能监测 过敏性紫癜患者中,有77%的患者会并发肾炎或肾病,而最早发生的变化是尿液中清蛋白增加。
3.肾小球肾炎的病情观察 病变急性期清蛋白排泄率明显升高,在恢复期趋于正常,但疾病稍有活动该指标立即上升。
4.其他 尿路感染时,尿清蛋白的排泄率轻度升高。某些特发性水肿的患者尿清蛋白排泄率也高于正常人。