实训3　培养材料取材与无菌培养技术

实训3　培养材料取材与无菌培养技术

【实训目的】

1.掌握植物组织培养的无菌操作技术。

2.培养学生无菌操作意识。

【试剂与主要用品】

1.仪器用具：超净工作台、接种工具、酒精灯、小型喷雾器、瓶刷、无菌纸或无菌培养皿、马铃薯试管苗。

2.试剂：MS培养基、2%新洁尔灭、70%酒精、2%来苏尔、甲醛、高锰酸钾。

【操作步骤】

具体操作步骤如下：

①操作人员进入接种室前必须用肥皂洗手。在缓冲间更换已消毒的工作服、帽子、口罩、拖鞋后方可进入接种室。

②打开接种室和超净工作台上的紫外灯，照射20～30 min。

③操作前10 min使超净工作台处于工作状态，让过滤空气吹拂工作台面和台壁四周。(https://www.daowen.com)

④用70%酒精喷雾室内和超净工作台降尘，并消毒双手和擦洗工作台面。

⑤操作中使用的各种接种工具如镊子、剪刀、支架、解剖刀等放入95%酒精中浸泡，在酒精灯上灼烧灭菌，然后放置在器械架上冷却。

⑥用70%酒精擦洗培养瓶瓶壁、瓶盖。

⑦左手拿培养瓶，右手轻轻取下瓶口包扎物或瓶盖，用火焰对瓶口进行灼烧灭菌。然后用镊子轻轻将瓶内培养材料取出，在无菌不锈钢盘上进行分割或切段。

⑧将切割后的材料用镊子轻轻接种在培养基中（注意材料生物学上下端），再用火焰对瓶口进行灼烧灭菌，盖上瓶盖或包扎好封口薄膜。

⑨接种完毕后，用记号笔在瓶壁上注明植物名称、接种日期等信息，以免混淆。

⑩实训结束后将工作台清理干净，并关闭超净工作台。

【结果与讨论】

1.观察接种材料的生长情况，并做好记录。

2.计算污染率，并分析污染原因。