实训4　愈伤组织的诱导

实训4　愈伤组织的诱导

【实训目的】

学习诱导植物外植体愈伤组织的方法。

【实训原理】

植物外植体材料在离体条件下，细胞经脱分化等一系列过程，改变了它们原有的特性继而转变形成一种能迅速增殖的为特定结构和功能的薄壁细胞团，即愈伤组织。在实践中，能否成功诱导出愈伤组织是细胞和组织培养的一个重要问题。影响愈伤组织诱导的因素较多，诸如植物的基因型、培养基的类型、外源激素的种类和浓度、培养条件等。

【试剂与主要用品】

1.仪器用具：超净工作台、灭菌锅、显微镜、解剖刀、镊子、烧杯、三角瓶、培养皿、移液管、新鲜胡萝卜。

2.试剂：培养基（MS培养基+1.0mg／L 2，4-D+0.5mg／L KT，pH为5.7）、70%乙醇、0.1%氯化汞溶液。

【操作步骤】

具体操作步骤如下：(https://www.daowen.com)

①将胡萝卜用自来水冲洗干净，用刀片刮去表皮1～2 mm，横切成大约10 mm厚度的切片。以下步骤全部在超净工作台内进行。

②胡萝卜经70%乙醇处理几秒后，用无菌水冲洗一遍，再用0.1%氯化汞溶液消毒10min，接着用无菌水冲洗3～4次。

③将胡萝卜片放入垫有无菌滤纸的培养皿中，一手用镊子固定胡萝卜片，一手用消毒好的解剖刀沿截面横切成厚度为1 mm左右的圆片，然后将圆片的韧皮部和木质部切去，留下形成层，再切成长3 mm、宽1.5 mm、高1 mm的小块。

④将切好的小块接种在配置好的MS培养基上，室温培养3～4周，即可诱导出愈伤组织。继代培养时，将老的和生长不良的愈伤组织去掉，将大的生长状态良好的愈伤组织切成小块，接种于1.0 mg／L 2，4-D的MS培养基上继续培养。

⑤诱导和继代培养均在黑暗条件下进行，培养温度为25℃，继代培养频率为3～4周更换一次培养基，观察并记录继代过程中愈伤组织状态的变化。

【结果与讨论】

1.统计污染率。

2.统计诱导率。