实训5　植物细胞悬浮培养及种细胞筛选技术

实训5　植物细胞悬浮培养及种细胞筛选技术

【实训目的】

1.学习植物细胞悬浮培养方法。

2.掌握常规筛选种细胞的方法。

【实训原理】

植物悬浮培养将植物单细胞或小细胞团在液体培养基中于摇床上振荡，振荡过程中细胞直接的连接被打断，使增殖细胞脱落下来。此外，悬浮培养处于理化环境均一的液体培养基中，有害物质不易积累，可以获得快速增殖的、分散性好、均一的小细胞团。悬浮培养应增加细胞与培养液的接触面，改善营养供应，并适当改善气体交换。

【试剂与主要用品】

1.仪器用具：超净工作台、摇床、高压灭菌锅、无菌刻度吸管（10 mL）、pH酸度计、无菌枪形镊、手动吸管泵、实训4诱导出来的愈伤组织。

2.试剂：MS培养基（液体，含1.0 mg／L 2，4-D，pH为5.7）。(https://www.daowen.com)

【操作步骤】

具体操作步骤如下：

①愈伤组织的诱导。见实训4。

②挑选分散性好、致密、鲜黄色或乳白色、生长旺盛的愈伤组织，放入配制好的液体培养基中，用镊子轻轻夹碎愈伤组织，掌握好力度不致损伤愈伤组织。每瓶接入约2 g愈伤组织，置于转速为100 r／min，25℃，无光照条件下振荡培养。

③用手动吸管泵吸取已建立的细胞小颗粒悬液，吸出培养液，保留2 mL压缩体积的细胞，转至25 mL／瓶新鲜培养液中，培养条件同步骤②。最初几代要勤换培养液，以防止褐化，一般3天左右更换一次新鲜培养液，2周后即可恢复正常的继代频率，每7天左右更换一次培养液。每次继代，用宽口吸管或一定孔径的细胞筛来选择细胞团，留下生长旺盛的小细胞团，弃去大的细胞团。

【结果与讨论】

1.讨论挑取愈伤组织时应注意的事项。

2.应该采用什么方法来判断细胞生长状况？