菖郁导痰汤对抑郁大鼠模型额叶5-HT2AR及其mRNA表达的干预
摘要
【目的】观察菖郁导痰汤对抑郁大鼠模型大脑额叶5-羟色胺受体A2（5-HT2AR）及其mRNA表达的干预，分析抑郁症的发病机制。【方法】经Open-Field法［1-3］评分测定，评分相近的48只SD普通级大鼠，随机分为4组：空白对照、模型组、菖郁导痰汤3.9g/kg组、氟西汀0.36mg/kg组。每组12只。采用孤养和长期不可预见的慢性应激21 d造成大鼠抑郁症模型，然后开始给药（ig）连续21d，取脑，免疫组化法检测与5-HT2AR，原位杂交法测5-HT2AR，mRNA的表达。【结果】与对照组比，模型组5-HT2AR和mRNA的表达数量明显下降，且5-HT2AR/mRNA增高（P＜0.01）；与模型组比，菖郁导痰汤组5-HT2AR和mRNA表达升高，5-HT2AR/mRNA下降（P＜0.01）。【结论】抑郁症发病可能与5-HT2AR及其mRNA的表达下降有关；菖郁导痰汤有抗抑郁作用，其抗抑郁作用机制可能是通过上调5-HT2AR及其mRNA的表达。
抑郁症是由各种原因引起的以抑郁为主要症状的一组心境障碍或情感障碍，是一组以抑郁心境自我体验为中心的临床症状群或状态［1］。世界卫生组织推测在未来20年内，抑郁症将是致残疾的第二大杀手［2-3］。菖郁导痰汤是从《温病大全》的菖蒲郁金汤配合《济生方》的导痰汤加减而成，具有化痰解郁、开窍醒神、调畅气机之功效，针对抑郁症以气机郁滞为先导，兼有痰湿阻滞之证，本实验以菖郁导痰汤为代表，探讨祛痰解郁之大法对抑郁大鼠模型额叶5-HT2AR及其mRNA表达的影响。
1.材料和方法
1.1动物
普通级成年SD大鼠，体重（200±20）g，雌雄各半，（由华中科技大学同济医学院动物试验中心提供，许可证号SCXK（鄂）2004-2007，Open-Field评分无差异的大鼠48只。
1.2药物
菖郁导痰汤，由江阴天江药业有限公司生产的单味药粉剂用生理盐水配制成0.39g/mL备用。盐酸氟西汀胶囊，20mg/粒，由上海中西制药有限公司生产，批号060701。
1.3试剂与仪器
免疫组化染色试剂盒及HTR2AR原位杂交检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。PCR仪（CSA22.2N01010-1型）；图像分析仪（奥林巴斯256型）；电子天平（上海YP1201N型）；冷冻切片机（德国莱卡LK-100型）。
1.4分组、造模、给药
经Open-Field法［1］评分测定评分相近的48只SD普通级大鼠，雌雄各半，随机分为对照组、模型组、菖郁导痰汤组、氟西汀组共4组，每组12只。对照组雌雄分组每笼饲养6只的群养法，各模型组孤养，且接受21d各种不同的应激，包括冰水游泳、热应激、电击足底、摇晃、禁食、禁水、夹尾、昼夜颠倒（以室内开灯为原则）等刺激，每种刺激每周1次，随机给予，7d为1个周期共21d造模。21d后开始给药，菖郁导痰汤组3.9g/kg，氟西汀组0.36 mg/kg溶于生理盐水2mL/只，ig，对照组正常饲养，模型组等量生理盐水，ig，连续3周。于末次药后2h断颈取材。
1.5标本处理
取大鼠全脑活标本，分离额叶，置4%多聚甲醛中固定，常规制片。免疫组化法检测5-HT2AR；原位杂交法测5-HT2AR-mRNA的表达。
1.6图片处理
在显微镜200倍视野下每张切片随机选取5个视野，计算阳性反应数量，取5个视野的平均值。
1.7数据处理
以SPSS13.0统计软件包进行统计处理。计量数据以
±S表示，组间比较用单因素方差分析，P＜0.05为有统计学意义。(https://www.daowen.com)
2.结果
2.1菖郁导痰汤对大鼠大脑额叶5-HT2AR及其mRNA表达的影响
与对照组比，模型对照组5-HT2AR明显下降（P＜0.01）；模型对照组mRNA的表达数量明显下降（P＜0.01）且5-HT2AR/mRNA比值增高（P＜0.01）。与模型对照组比，菖郁导痰汤组额叶5-HT2AR明显升高；mRNA表达明显升高，且以上指标的改善均优于阳性对照药氟西汀组（P＜0.01）。5-HT2AR/mRNA比值下降（均P＜0.01）。
表1 菖郁导痰汤对大鼠大脑额叶5-HT2AR及其mRNA表达的影响（
±S，n=12）
注：与模型组比较1）P＜0.01；与氟西汀组比2）P＜0.01。
3.讨论
5-HT2AR在抑郁症病因和抗抑郁剂机制中研究较多，王立伟等人认为4］抑郁症发病与5-HT2AR降低有关。但有人认为［5］5-HT2AR与抑郁症患者未见明显相关，提示5-HT2AR基因可能不是单相抑郁症发病的风险基因之一。
抑郁症属祖国医学“郁证”范畴，认为郁证的发生主要因为阳气不足、气机郁滞，表现全身功能低下的抑郁状态。郁证病因虽多，但其因素不外乎气、血、痰、湿、热、食等6种，即《丹溪心法》之“六郁”说。正如《中医内科诀要》［6］所云：“情志不舒郁症生，六郁总由气郁成。”气郁是郁证的原始病因，多见疾病早期阶段，随着病情的发展，其他“五郁”渐见，而以痰郁最为常见，且六郁中都程度不同地存在着“痰气郁结”之因素。可以认为“痰”是影响郁病发生和加重的直接的、关键的因素。故认为“痰”是抑郁症进展的直接原因，且贯穿该病的全过程。本实验所用的菖郁导痰汤是《温病大全》菖蒲郁金汤，配合《济生方》的导痰汤加减而来，立祛痰解郁之大法，组方具有化痰解郁、开窍醒神、调畅气机之功效。本研究在模型复制后，再给予灌胃治疗，发现抑郁模型额叶5-HT2AR及其mRNA的表达与模型组比较均升高，起到抗抑郁的效果。
本实验提示，慢性应激模型大鼠额叶的5-HT2AR及其mRNA表达降低，是模型大鼠处于抑郁状态，经菖郁导痰汤治疗后，5-HT2AR及其mRNA表达均与正常对照组相当水平。我们可以初步推测，抑郁症的发病机制可能与5-HT2AR及其mRNA的表达水平降低有直接关系；同时也表明祛痰解郁之法治疗抑郁症具有一定可靠性，本方具有一定抗抑郁效果，抗抑郁机制有可能是通过调节5-HT神经能系统活动的抑制状态，干预了5-HT2AR及其mRNA的表达有关。
参考文献
［1］谢忠礼.加味四逆散对恶劣心境障碍模型大鼠行为学影响［J］.陕西中医学院学报，2004，7（4）：60.
［2］沈渔邨.精神病学［M］.4版.北京：人民卫生出版社，2003：426.
［3］World Health Organization.The world health report 2001.Mental health，new understanding，new hope［C］.Geneva，Switzerland：WHO Marketing and Dissemination，2001，288（5463）：39.
［4］王立伟，江三多，汪栋祥，等.5-羟色胺6受体基因多态性与抑郁症的关联研究［J］.中华精神科，2000，11（4）：216.
［5］汪广剑，仲爱芳，张理义，等.单相抑郁症与5-羟色胺2A受体基因多态性的关联研究［J］.四川精神卫生，2002，15（3）：147.
［6］郭选贤.中医内科诀要［M］.郑州：河南科学技术出版社，1994：77.
（刊登于《中国实验方剂学》2011年第17卷第6期，与孙林、谢忠礼、郭选贤 合作）