胚胎的冷冻标准化操作流程
胚胎的冷冻是辅助生殖实验室的重要操作内容之一。现在实验室一般采用玻璃化冷冻的方式,其可以满足胚胎冷冻的大多数要求。玻璃化冷冻的具体操作方式如下:
1.首先确定需要冷冻胚胎的夫妇双方姓名,冷冻枚数,并进行冷冻位置的选择,如1-7-2-8(1号罐、7号提篮、2层、8号位置)。以上操作在胚胎冷冻储存系统中进行,要求两人核对,核对无误实验室人员需在胚胎冷冻记录表中签字确认,打印用于标记的胚胎冷冻标签备用。
2.确认患者的《胚胎冷冻知情同意书》及缴费情况。
3.在《FET实验室记录》和每位患者的《实验室记录》上登记。
4.单独准备一张汇总表,填写当日将要进行冷冻操作的汇总表,应包括冷冻号、姓名、冷冻位置、每种颜色载杆上的胚胎位置,以备进行核对。
5.准备1个冷冻皿、100μL枪及枪头、镊子、纱布、液氮等,并从冰箱中取出冷冻液将其复温至工作温度。
6.工作台在室温下,准备冷冻液:取60mm培养皿、基础液、平衡液、冷冻液。用前摇晃均匀,用100μL枪头加BS(或使用箱外操作液)、ES各100μL,VS做3个液滴,每个液滴30μL左右。用完封瓶,放入冰箱的相应位置。提前备冷冻液,让其复至室温。
7.关灯。将需要冷冻的胚胎临时放到左手边的培养箱中,将提篮放到液氮桶中,将载体的帽放到液氮盒里,纱布随时盖灯。(https://www.daowen.com)
8.BS 1min—ES 5min—三滴VS各20s。将胚胎放到液体后,开始计时。在VS中要连续吹打,最后放到载杆上,尽量少吸液体。迅速将载杆放入液氮中,在液氮中套上帽,注意始终不能离开液面。将载杆快速放到提篮里,放到液氮罐中的相应位置。
图5.12 冷冻皿制作图示
9.冷冻囊胚之前,将囊胚的滋养层进行激光穿透,进行人工皱缩后方可进行冷冻操作。
10.胚胎冷冻皿可以采用商品化冷冻皿或35mm/60mm培养皿制作(图5.12)。
11.现在市面上有多种冷冻解冻液在售,其具体操作方式不尽相同,需根据产品说明书进行适当调整,从而确保实验室胚胎冷冻操作的可靠性。
12.如患者本周期实施的是全胚冷冻,则应该签署《全胚冷冻放弃新鲜移植知情同意书》后再实施全胚冷冻。
13.以上操作需严格落实双人核对制度。
