玻璃化解冻标准化操作流程
胚胎解冻是进行胚胎解冻移植的主要操作步骤,解冻移植前应确认各项解冻信息,确定解冻方式方可寻找胚胎进行解冻操作,具体操作流程如下:
1.根据主管医师医嘱填写《IVF-ET解冻周期实验室记录》,将实验室内该患者关联的新鲜周期实验室记录找出,熟悉进行解冻移植患者的相关情况,提前准备试剂耗材。根据工作安排,主管医师应在解冻移植手术前至少2日进行手术确认并通知实验室。
2.根据次日解冻移植计划,统计解冻移植汇总表。
3.根据当日需要的解冻患者数量进行解冻液准备:准备一个中央井皿,一个四孔皿,在皿盖上分别贴上患者标签。四孔皿正面向上,打开,斜面在左下角,正上方写上名字,左下角写M(囊胚培养液),右下角S4,右上角S3,左上角S2,中央井皿盖上标记S1。
4.从冰箱中拿出解冻液及M液。解冻液用前需摇晃均匀。用1mL移液器分别吸取M 1mL,S4 0.5mL,S3 0.5mL,S2 0.5mL到四孔皿中;1mL S1注入中央井皿内圈,注意加液时,吸入和吹出时都要将移液管放到底,避免吹出气泡;之后将中央井培养皿放入培养箱复温至少30min至37℃。(图5.13)
图5.13 解冻皿标记及备液方式(https://www.daowen.com)
5.根据记录好的位置,前往胚胎库将计划解冻的胚胎从液氮罐拿出;核对冷冻标签上的姓名、冷冻位置。储存位置取出放入盛满液氮的解冻盒中,此过程需要双人核对双人参与。
6.解冻前再次双人核对冷冻载杆上的信息,包括姓名、枚数、冷冻位置、时间。核对无误后,方可开始解冻操作。
7.在液氮中将载杆的帽摘掉,将载杆迅速放入S1 1min,轻轻摇动,此过程眼睛不要离开显微镜,直到看到胚胎。S2、S3、S4各3min。放入M液中3min。在四孔皿中转移胚胎,注意将管拿高,防止管头碰到四孔皿壁上。然后放到37℃台10min。
8.转入移植皿中,放入培养箱,等待次日移植。
9.在原新鲜周期记录及解冻周期实验室记录中完善相关记录。
10.以上操作需严格落实双人核对制度。
