8.1　Hpo信号的失活能够激活JNK通路

为了检测Hpo信号通路失活能否激活JNK信号通路，我们检测了体内puc及MMP1这两个JNK下游报告基因的表达情况[126]。与对照相比（图8-1 A），在sd启动子的驱使下过表达hpo RNAi，wts RNAi或过表达高度活化的Yki（YkiS168A）都能够在翅成虫盘中间区（wing pouch）激活puc的表达（图8-1 B—D）。作为阳性对照，过表达JNK上游激酶Hep同样能够激活puc的转录（图8-1 E）。接着我们进一步检测了MMP1的表达情况。在对照组中，MMP1仅仅会在气管及背板小部分区域表达[153]（图8-1 G），而在Yki过表达时，MMP1表达显著上升（图8-1 H）。最后，我们又用JNK特异性的磷酸化抗体直接检测了Yki对体内JNK活化的影响。结果显示，无论是ptc＞YkiS168A（图8-1 K）还是YkiS168A过表达克隆中（图8-1 N），JNK磷酸化水平都显著上升。以上实验证据充分证明Hpo信号通路的失活能够激活果蝇体内JNK信号通路的活化。

(https://www.daowen.com)

图8-1　Yki和Yap表达能够激活果蝇体内JNK信号通路（见彩图17）

（A—F）光学显微镜3龄幼虫翅成虫盘X-Gal染色图片。与对照相比（A，sd-Gal4；puc E69/+），下调hpo（B，sd-Gal4；UAS-hpo.RNAi/+；puc E69/+）或wts（C，sd-Gal4；puc E69/UAS-wts.RNAi）表达，过表达YkiS168A（C，sd-Gal4；puc E69/UAS-YkiS168A），Yap S127A（C，sd-Gal4；puc E69/UAS-Yap S127A）或Hep（B，sd-Gal4；UAS-Hep WT/+；puc E69/+）都能够激活puc转录。
（G—O）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体染色图片。与对照相比（G，J，ptc-Gal4 UASGFP/+），过表达YkiS168A（H，K，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/+）或YapS127A（I，L，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YapS127A/+）能够诱导MMP1表达（G—I）以及JNK磷酸化上调（J—L）。与对照克隆相比（M，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+），诱导YkiS168A（N，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/+）或Yap S127A（O，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Yap S127A/+）过表达克隆也能够上调JNK磷酸化水平。