8.2 JNK信号通路调控Yki诱导的增殖和生长
Hpo信号通路通过调控细胞数量影响器官大小，与此相符的是，我们发现ptc＞YkiS168A翅成虫盘中，PH3这一细胞有丝分裂特异性标记物数目显著增多（图8-2 B，D），而在此基础上过表达Bsk DN下调JNK活性不但明显地抑制PH3阳性细胞数目的增多，同时也抑制了Yki诱导的过度生长表型（图8-2 C，D）。我们进一步的克隆实验表明翅成虫盘中过表达YkiS168A引起的克隆过度生长表型同样可以被过表达Bsk DN所抑制（图8-2 E—H），而单独过表达Bsk DN并不会对克隆生长产生影响（未显示）。
为了排除细胞凋亡对实验结果造成的影响，我们检测了Caspase 3的活性，结果显示过表达Bsk DN并不能明显诱导凋亡发生（图8-3 C），而我们在ptc＞YkiS168A果蝇中偶尔能观察到非自发性地细胞凋亡（图8-3 B），这与前人研究结果相符[154]。以上实验结果表明JNK信号通路调控了Yki诱导的增殖以及器官生长。
为了进一步探究JNK调控Yki诱导细胞生长的机制，我们检测了JNK信号通路下调对Yki下游报告基因表达的影响。研究表明wingless（wg），expanded（ex），Diap1以及CycE都参与了Yki诱导的生长调控[155]。我们发现过表达Bsk DN能够完全抑制了Yki对于wg的激活（图8-2 I—K），却不能抑制ex以及Diap1的激活（图8-2 L—N，图8-3 J—K）。此外，我们发现Yki并不能激活翅成虫盘中CycE的表达，这与之前研究发现Hippo信号通路对于CycE的调控存在组织特异性的结论相符[146]。同时，与我们前面结果相符的是，YkiS168A诱导的MMP1以及puc这两个JNK下游报告基因的表达均可以被过表达Bsk DN抑制（图8-3 D—I）。根据以上结果，我们认为wg并非是Yki的直接转录调控的靶基因，而是其通过JNK信号通路间接进行调控，与这个解释相符的是，已有的研究发现Wg能够被JNK通路激活，进而参与了果蝇中补偿性增殖的调节[23]。
图8-2 JNK调控了Yki诱导的过度生长与Wg激活（见彩图18）(https://www.daowen.com)
（A—D）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘PH3抗体染色图片。与对照相比（A，ptc-Gal4 UAS-GFP/+），过表达YkiS168A（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UASLacZ）引起的增殖和生长表型能够被同时过表达Bsk DN所抑制（C，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-Bsk DN）。（D）A—C中PH3阳性细胞数量统计图。P值由t检验算出，表示平均值+S.D.，n＞5，（***P＜0.001，**P＜0.01）。
（E—H）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘图片。与对照克隆相比（E，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+），YkiS168A过表达引起的过度生长（F，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-LacZ）可被同时过表达Bsk DN所抑制（G，hs-Flp；act＞y+＞Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-Bsk DN）。（H）E—G中克隆面积大小统计图。
（I—N）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘抗体染色图片。与对照相比（I，ptc-Gal4 UAS-GFP/+），过表达Yki诱导的Wg激活（J，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-LacZ）能够被Bsk DN抑制（K，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-Bsk DN）；而Yki诱导的ex转录水平上调（M，ptc-Gal4 UAS-GFP/ex-LacZ；UAS-YkiS168A/+）却不会被Bsk DN抑制（N，ptc-Gal4UAS-GFP/ex-LacZ；UAS-YkiS168A/UAS-Bsk DN）。
图8-3 Yki和Yap能激活JNK依赖的下游基因表达（见彩图19）
（A—C）与对照相比（A），过表达YkiS168A（B）或者在此基础上再过表达Bsk DN（C）均不能引起很强细胞凋亡发生。（D—I）与对照相比（D，E），YkiS168A诱导的puc或MMP1激活（F，G）能够被BskDN抑制（H，I），但YkiS168A引起的diap1激活（J）却不能被下调JNK所抑制（K）。（L—N）在翅成虫盘中过表达YkiS168A引起不能激活CycE表达（M），作为阳性对照，过表达CycE可以很强的激活（N）。（O—P）过表达YapS127A 引起的MMP1激活（O）同样能够被BskDN抑制（P）。（A，E，L）ptc-Gal4UAS-GFP/+.（B，G）ptc-Gal4UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-LacZ.（C，I）ptc-Gal4UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-BskDN.（D）ptc-Gal4UAS-GFP/+；pucE69/+.（F）ptc-Gal4UAS-GFP/+；pucE69/UAS-YkiS168A.（H）ptc-Gal4UAS-GFP/+；pucE69/UAS-YkiS168AUAS-BskDN.（J）ptc-Gal4UASGFP/+；UAS-YkiS168A/diap1-LacZ.（K）ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A UAS-Bsk DN/diap1-LacZ.（M）ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/+.（N）ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-CycE/+.（O）ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Yap S127 A/tub-Gal80ts.（P）ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Yap S127 A UAS-Bsk DN/tub-Gal80ts.