8.3　Yki通过Rho1调控JNK信号通路

为了阐明Yki调控JNK活化的分子机制，我们对Yki与JNK信号通路成分进行了遗传学上位性分析实验。我们发现下调hep（图8-4 C）或者d TAK1（图8-4 D）的表达都能显著性抑制ptc＞YkiS168A诱导的过度增殖（图8-4 B），表明Yki位于d TAK1的上游。已知Rho GTPase家族成员能够调控d TAK1介导的JNK活化[156，157]，而近年来研究更是发现Rho1调控了d TAK1依赖的细胞凋亡以及补偿性增殖[158，159]。与此相符的是，过表达Rho1能够激活puc转录（图8-5 E，F）。我们发现用两个不同来源的Rho1 RNAi都能够明显抑制YkiS168A诱导的过度生长表型（图8-4 E，图8-5 A—D）。此外，下调Rho1表达同时抑制了YkiS168A对于puc，MMP1以及Wg的激活（图8-4 F—K）。这些实验结果表明Rho1对于YkiS168A诱导的JNK活化与生长是必需的。

图8-4　Rho1调控了Yki诱导的生长与JNK活化（见彩图20）

（A—E）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘图片。与对照相比（A，ptc-Gal4 UAS-GFP/+），过表达YkiS168A引起的过度生长（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-LacZ）能被下调hep（B，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-hep.RNAi），d TAK1（ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-d TAK1.RNAi）及Rho1（ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-Rho1.RNAi）所抑制。
（F—I）过表达YkiS168A诱导的puc激活（F，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/pucE69），MMP1及Wg激活（H，I，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-LacZ）能够被Rho1下调所抑制（J，K，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-YkiS168A/UAS-Bsk DN）。
（L—N）YkiS168A过表达不能诱导细胞凋亡发生（L，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UASYkiS168A/+），而Rho1过表达却可以（M，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/+）。抑制Rho1引起的凋亡能够诱导增殖及过度生长表型（N，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-p35）。(https://www.daowen.com)

为了检测Rho1上调是否足以引起增殖及过度生长的表型，我们在翅成虫盘中沿前后轴过表达Rho1，与之前结果相符[158]，Rho1诱导很强的细胞凋亡发生（图8-4 M′）并能激活Wg表达（图8-5 H），但GFP阳性区域并无明显增殖表型（图8-4 M）。而我们发现有趣的是，当Rho1激活的凋亡被过表达p35所抑制后，便能够大量激活Wg表达（图8-5 I），并产生与YkiS168A过表达类似的增殖和过度生长表型（图8-4 N）。以上证据表明Yki诱导的过度生长表型是由两条下游信号组成：一条是Rho1-JNK调控的Wg表达，细胞增殖与凋亡；而另一条则是DIAP1介导的细胞凋亡抑制。

图8-5　Rho1调控了Yki诱导的生长（见彩图21）

（A—D）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘图片。YkiS168A诱导的过度生长能被过表达不同的Rho1 RNAi所抑制。
（E—F）光学显微镜3龄幼虫翅成虫盘X-Gal染色图片。过表达Rho1能够很强地激活puc转录（F，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/puc E69）。
（G—I）荧光显微镜3龄幼虫翅成虫盘Wg抗体染色图片。过表达Rho1能够微弱地激活Wg表达（H，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/+，白色箭头），在此基础上过表达p35抑制细胞凋亡能够诱导过度增殖及Wg的大量表达（I，ptc-Gal4 UAS-GFP/+；UAS-Rho1/UAS-p35）。