6.3.3　Wnt 经典信号增强线粒体能量合成相关酶活性

PYGL 是细胞内利用糖原分解增加可利用代谢底物葡萄糖的关键酶，它通过催化α，1-4 糖苷键断裂而将糖原分解为葡萄糖-1 磷酸，在细胞利用贮存的糖原作为能量来源的过程中起着决定性作用。GLUD1 是细胞利用谷氨酸和谷氨酸胺两种氨基酸作为代谢底物的重要酶类，它可以将线粒体基质内的谷氨酸还原为α-酮戊二酸，而α-酮戊二酸是三羧酸循环（TCA cycle）上一个非常重要的中间代谢物。Z-VAD 是caspase 家族的广谱性抑制剂，当caspase 酶活性被抑制时细胞的凋亡通路会被阻断，而趋向于坏死。所以，我们利用Z-VAD 处理来检测Wnt 经典信号对坏死细胞与凋亡细胞能量代谢途径中PYGL 和GLUD1 的酶活性的调控作用。Z-VAD 是一种细胞凋亡抑制剂，能很好地抑制caspase 依赖性细胞凋亡。研究结果显示，Wnt3a 和Wnt3a+BCG 处理后细胞的PYGL 和GLUD1 的酶活性极显著高于对照（P<0.01），BCG 单独处理及Z-VAD+BCG 处理细胞的酶活性显著低于对照（P<0.05）（图6-11、图6-12），这表明坏死细胞的这两种酶活性较低，这可能是由于坏死细胞的细胞膜破裂，大部分细胞器受损失去功能，从而导致线粒体无法完成其能量生成过程所致。

图6-11　Wnt 经典信号对BCG 感染后巨噬细胞PYGL 酶活性调控作用

图6-12　Wnt 经典信号对BCG 感染后巨噬细胞GLUDⅠ酶活性调控作用

但是，据报道，细胞坏死过程中PYGL 与GLUD1 活性与ROS 的产生成正比，但是本实验并没取得相似的结果，如Wnt3a 提高感染BCG 后细胞的这两种酶活性，但是却降低了其ROS 的含量和坏死率，这是否因为激活Wnt经典信号通路后，同时增强了细胞内的清除活性氧的能力？因此，以下的试验通过测定谷胱甘肽（glutathione，GSH）的含量来验证这个现象。