四、操作方法
（一）性状
取本品5瓶（支），将内容物倾倒在洁净干燥的表面皿上观察。应为无色结晶、白色或类白色的结晶性粉末。
（二）鉴别
氨制硝酸银试液反应：取本品约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生产银镜。
（三）检查
1.溶液的颜色 取本品5瓶（支），加水10ml使溶解，与同体积的对照溶液（取比色用重铬酸钾液3.0ml与比色用硫酸铜液0.10ml，加水稀释至250ml）比较，不得更深。
2.酸碱度 取本品0.50g，加水10ml溶解后，依法用酸度计测定，pH应为6.0～8.0.
3.游离肼 采用薄层色谱法进行检查。
（1）供试品溶液的制备：取本品1.0g，置10ml容量瓶中，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液（100mg/ml）。
（2）对照品溶液的制备：精密称取硫酸钾对照品25mg，置50mL容量瓶中，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为原始溶液；精密量取溶液8mL，置50ml容量瓶中，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液（0.08mg/ml，相当于游离肼20μg/mL）的溶液。
（3）系统适用性试验溶液的准备：取异烟肼1.0g，再量取硫酸肼对照品溶液制备中的原始溶液1.6ml，置10ml容量瓶中，加丙酮-水（1∶1）溶解并稀释至刻度，振摇，制成每1ml中分别含异烟肼100mg及硫酸肼0.08mg的混合溶液，作为系统适用性试验溶液。
（4）点样：吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上。
（5）展开：以异丙醇-丙酮（3∶2）为展开剂，用倾斜上行法展开，待展开后，取出薄层板，晾干。
（6）显示与检视：喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视。
（7）结果判断：系统适用性试验溶液所显游离肼与异烟肼的斑点应完全分离。游离肼Rf值约为0.75，异烟肼Rf值约为0.56在供试品溶液主斑点前方与对照品溶液主斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
（四）含量测定
1.操作方法
（1）平均装量的测定：取供试品5瓶（支），除去标签、铝盖（开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中），容器外壁用乙醇擦净，干燥，分别迅速精密称定，倾出内容物，容器用水或乙醇洗净，在适宜条件下干燥后，再分别精密称定每一容器的重量，求出每瓶（支）的装量与平均装量。
（2）含量测定：色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.02mol/L磷酸氢二钠溶液（用磷酸调pH至6）-甲醇（85∶15）为流动相；检测波长为262nm。理论板数按异烟肼峰计算不低于4000.
方法：将上述平均装量测定的内容物，混合均匀。精密称取适量，加水溶解并定量稀释制成每1mL中约含0.lmg的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取异烟肼对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。《中国药典》2015年版规定，本品按平均装量计算，含异烟肼（C6H7N3O）应为标示量的95.0%—105.0%。
2.含量计算
式中，AX为供试品溶液的峰面积或峰高；AR为对照品溶液的峰面积或峰高；CR为对照品的浓度（mg/mL）；V为供试溶液的初始体积（mL）；D为供试溶液的稀释倍数；m为供试品的取样量（mg）。