常见细胞形态学检查制片方法
(一)传统涂片(conventional smear)制作
1.直接涂片
可用于脱落细胞学和穿刺细胞学。根据不同的样本,可针对性采用不同的涂片方法,包括推片式、直线方向涂抹式、顺时针或撕拉式涂片等。涂片要求手法轻柔、防止挤压损伤细胞、细胞分布均匀、厚薄适度,太厚细胞重叠影响镜下观察,太薄细胞过少影响阳性检出率。样本内容物应涂在载玻片右侧2/3范围内,留有标签粘贴空间。
2.离心涂片
适用于各类液态样本。原则上将液体离心后,弃上清,取沉渣涂片。富含血液或细胞量少的样本需增加步骤处理。
(二)印片(touch imprint)制作
常见用途为前哨淋巴结术中印片、空芯针活检物印片或神经病理术中印片等,因方法简便快捷,可满足术中和现场评价等快速诊断的需求。基本步骤为将组织学小活检或手术切除标本的新鲜剖面在固定前轻触玻片即可制成印片,详细步骤因印片用途不同而有所差异,例如前哨淋巴结印片对切面方向和间隔距离等有其特殊要求,参见其他相关文献,本书不作展开。
(三)压片(squash smear)制作
压片目前临床应用极少,常用于神经病理术中诊断。其方法是将微小病变组织碎块放置于玻片中央,其上放置另一玻片,然后用力挤压两玻片使夹于中间的组织铺展,再沿长轴将两玻片向相反方向拉开,完成压片。
(四)细胞离心机(cytospin)制片
该技术通过细胞离心机完成离心甩片等步骤,最终制成薄片,有助于提高细胞收获量且保证细胞传统形态,常用于浆膜腔积液、脑脊液、肺泡灌洗液、尿液或其他细胞学液体样本的处理。各生产商在推出时会增加前期血液、黏液的处理过程,以便达到更好的制片效果。
(五)液基细胞学制片
液基细胞病理学(liquid based cytology, LBC)制片技术是指采用薄层制片自动装置制备细胞病理学样本的一种方法。LBC制片首先将临床取得的细胞病理学样品保存在液基保存液中,然后再通过一定的技术方法将细胞薄层均匀地转移到玻片上,再进行染色镜检。其主要优点在于:① 制片过程标准化,规范化;② 质量稳定,可重复制片;③ 采集样本后放入液基保存液,固定及时,细胞不易退变;④ 可明显减少血液、黏液及炎症细胞等可能影响目标细胞观察的成分;⑤ 自动化薄层制片,细胞分布区域固定且面积小,减少重叠和机械损伤,有利于缩短阅片时间,并便于数字阅片;⑥ 液基保存液可长期有效保护细胞的蛋白质及核酸质量,可开展反馈性或回顾性分子病理学及免疫细胞化学检测。LBC最早并主要应用于妇科细胞病理学检查,近年来也应用于纤维支气管镜刷片、浆膜腔积液、痰液、尿液、甲状腺穿刺等非妇科细胞病理学常规检测。
(1)根据液基制片产品的制片原理不同,目前LBC制片设备可分为以下几种(https://www.daowen.com)
1)微孔膜过滤技术:其主要原理是通过对液基样本过滤,有选择性地留取有价值的细胞成分制片,减少无诊断意义的成分。其制片过程主要包括细胞分散、(随机)取样、过滤、转移等过程。此类产品技术的核心是高精度程控过滤技术,关键内容包括过滤膜质量、自动化处理程序、随机化取样控制及细胞转移。
2)离心沉降制片技术:其主要制片原理是通过二次离心,即第一次密度梯度试剂加程控离心,分开并减少血液、黏液及大部分无诊断意义的炎症细胞;第二步离心集中细胞,再通过自然沉降制片。此类产品的技术核心在于比重液。
(2)优质薄层液基细胞学制片产品应具备以下条件及特点
1)产品应具有国家行政部门的审批注册,并依据相关法规,符合准入标准,如宫颈细胞病理学检查取样设备应符合二类医疗器械管理要求。
2)能选择性收集足量的供诊断用细胞,尽可能去除干扰诊断或无诊断意义的成分。
3)样本能随机化取样,以保证诊断正确性和可重复性。
4)制片过程尽可能自动化,以减少人为的干扰。
5)细胞应均匀薄层、不出现拥挤重叠或涂片空洞、中央空晕等现象。
6)细胞人为假象少,背景清晰,能有效处理过多的炎症、血液和黏液等成分。
7)配合规范的染色方法,能做到细胞染色佳、层次分明、核结构清晰、对比度明显。
(六)细胞蜡块制作
细胞蜡块(cell block)是一项将送检样本通过离心富集细胞浓缩成块后再用石蜡包埋起来切片的实用的细胞病理学技术,对细胞病理学诊断有很大的意义。该技术可以最大限度地保留残存的组织学结构,细胞及小组织碎片相对集中,有助于获得更多的诊断信息,且可重复多次切片,较适用于特殊染色、免疫细胞化学及分子病理学等辅助检查。现常用制作方法有琼脂凝胶法、血浆凝集法、酒精凝集法等。但其制作需要优质足量的样本为前提,才能成功地获得优质的细胞蜡块。
(七)特殊样本的处理
特殊样本主要包括富含血液或黏液的样本、细胞量少的样本以及传染性样本等,这些样本的制片可能需进行预处理或有特殊注意事项,详见附录3。