细胞病理学样本的辅助检查方法
现代细胞病理学已不仅仅局限于单纯的形态学诊断，使用细胞病理学样本进行特殊染色（组织化学）、电镜、免疫表型分析、细胞遗传学以及分子检测等辅助检查已逐渐开展，并在某些领域得到普及或广泛开展。辅助检查不仅可用于肿瘤相关的鉴别诊断和治疗决策制订，也可用于辅助病原微生物的检测。一方面，ROSE的应用可前瞻性地合理分配细胞学样本开展辅助检查；另一方面，细胞蜡块和某些细胞保存液（液基细胞学保存液及其他）的应用使得细胞学样本可被相对更长期地保留，以便用于回顾性辅助检查。采样到制片环节中的进步使得在组织学样本可以开展的辅助检查几乎都能应用于细胞学样本，甚至适合细胞学样本的检测方式更为多样，例如细针穿刺洗脱液的肿瘤标记物检测以及液体样本的游离核酸（cell-free nucleic acids）检测等。结合形态、多种辅助检查方式及临床信息的综合细胞学诊断模式使细胞学的应用价值得到进一步扩大。以下着重介绍细胞病理学样本的常用辅助检查方法。
（一）特殊染色
特殊染色方法多样，除前述Romanowsky类染色可用于常规细胞形态学检查外，Romanowsky类染色加之其他方法亦可作为辅助检查的工具。细胞病理学领域内，这类相对古老的染色方法少数情况下可用于肿瘤性疾病的诊断和鉴别诊断，例如刚果红染色和网状染色分别用于甲状腺髓样癌和肝细胞癌的鉴别诊断，更多的情况下则用于辅助病原微生物检测，例如PAS、抗酸染色和六胺银染色等。常用特殊染色试剂、染色步骤、染色效果及注意事项见附录4，商品化的染液成分及染色步骤参见产品说明。
（二）免疫表型检查
免疫表型检查包括免疫细胞化学检查（immunocytochemistry， ICC）和流式细胞免疫表型分析（flow cytometric immunophenotyping， FCI），多数用于辅助肿瘤的诊断和鉴别诊断，包括辅助肿瘤精准治疗方法的选择，少数情况下亦可用于感染性疾病的辅助诊断。
1.免疫细胞化学检查(https://www.daowen.com)
可在细胞蜡块和传统涂片/印片/细胞离心机制片/液基片上开展。细胞蜡块更为常用，因可进行连续切片，更利于在同区域目标细胞中对照判断成组抗原的检测结果，此外，检测条件与组织学石蜡包埋样本更为接近。涂片/印片/细胞离心机制片/液基片同样可进行ICC检测，尤其在样本量或目标细胞稀少的情况下，可能较细胞蜡块更有优势。当未能前瞻性留取ICC检测的细胞学样本，或目标细胞稀少时，可尝试对已染色的细胞学档案片进行细胞转移（cell transfer）来开展ICC检测，包括将档案片的目标区域进行分割，成片转移至新的玻片或者刮片后包埋成细胞蜡块。使用一步法的快速ICC检测近年来在细胞病理学领域也有所开展，例如可用于术中印片或其他需要快速辅助诊断的情况下。无论哪种ICC方法，均需规范开展质控，建议参考免疫组织/细胞化学质控相关内容。由于细胞学样本保存/固定方法较为多样，甚至细胞蜡块制作方法亦有多种选择，因此特别需重视规范建立检测条件和设立恰当的对照，已有的组织学样本检测条件在不同制作方法的细胞学样本应分别予以验证后再行使用，或摸索并验证新的检测条件。此外，需注意保存液/固定液种类、保存/固定时间以及恰当防脱片措施的选择。由此避免因方法偏倚影响着色强弱，甚至导致假阴/阳性或无法判断（严重脱片和非特异性染色）等情况。尚应严格把握判读标准，通过结合形态、其他抗原表达情况以及对照组织，准确识别出目标细胞并判断其表达水平。
2.流式细胞免疫表型分析
FCI为依赖抗原-抗体-荧光素结合原理的蛋白水平检测，技术优势在于可在单个细胞上同时标记多种荧光抗体，并行计算机多参数定量分析。FCI使用细胞悬液形式进行检测，无切片损耗，但难以进行镜下形态学观察，且临床应用中通常需使用新鲜未固定的标本，标本分配时应注意。对于细胞病理学样本，FCI主要价值为淋巴造血系统肿瘤的诊断与鉴别诊断，包括良恶性鉴别、淋巴造血系统肿瘤谱系来源鉴别及部分亚型的鉴别。需认识到当样本中免疫表型异常细胞过少或夹杂大量反应性细胞时诊断可能较困难，故FCI目前尚未能常规应用于诊断霍奇金淋巴瘤；极少数T细胞性非霍奇金淋巴瘤因免疫表型异常不明显而导致诊断困难；发生严重坏死的非霍奇金淋巴瘤（常见于弥漫性大B细胞淋巴瘤）可因胞膜脱落导致FCI发生假阴性诊断，但可通过结合形态学检查防止漏诊。质控要求建议参阅FCI相关规范。
（三）分子和细胞遗传学检查
该领域内辅助检查方式极其多样，其中多数检查可共用于组织学和细胞学样本，少数检查主要针对细胞学样本开展，例如部分人乳头瘤病毒（human papilloma virus， HPV）检测和DNA倍体分析项目等。有些检查利用细胞学样本开展更有优越性，例如涂片/印片/细胞离心片/液基片等因无切片过程，更适合DNA倍体分析和荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization， FISH）等对细胞核完整性有较高要求的检查。质控要求请参阅分子诊断领域相关指南。除需遵守通用的质控要求外，细胞学与组织学样本分子检测的主要差异在于检验前过程，包括样本的采集指导、如何确认样本是否满足检测要求以及样本处理和储存等。例如，需评价细胞学样本中目标细胞的数量、比例和分布方式，并选择是否采用以及采用何种细胞富集方法。用于分子检测的细胞学样本目标细胞评价方法因制片类型及检测需求而异，方法举例参见附录5，仅供参考。检验过程中，应注意针对不同样本类型和不同的样本量选择检验程序，并进行方法学验证和确认。例如，必要时对不同保存及固定方法处理的细胞学样本进行核酸提取方法的调整，并按需进行核酸定量。检测报告中应纳入适当的注释，表明检测可能存在的局限性及后续建议等。例如，对于难以评价目标细胞数量和质量的细胞学样本，需指出由此可能对检测结果造成的影响。