构建能够运载并表达此基因的运输工具——载体

基因分离出来后，是否可以将它直接引进受体细胞或生物中去呢？自然，这也未尝不可，而且似乎是一条捷径。但是，一个孤零零的、裸露的基因往往不易进入细胞，因为每种细胞都有称作限制修饰系统的屏障，以防止外来入侵者。即使基因能侥幸进入，也未必能在受体染色体上插队落户，不是被破坏掉，就是在细胞分裂时被清除掉。所以，孤军作战未必是上策。再者，基因总是积累到足够的量才好利用，这就需要有适当的复制系统。此外，科学家有一种有益的癖好，总希望把各种基因都保存起来，建立一个类似于银行的基因库或基因银行。这些问题的解决均需依赖于基因载体。载体也是一种DNA，物以类聚，否则基因就不好入座了。

载体是一种比染色体小得多的DNA，它通常分为两大类：一类叫作质粒（Plasmid），因存在于细菌细胞质中，故得此名）；另一类是噬菌体或病毒。

载体的基本作用，就是携带所需基因，并将它运到适当的受体细胞中去。入选载体必须具备的条件：一是具有复制功能，即能够复制自己和侨居的外源DNA；二是具有外源DNA侨居位点（即插入点），而且在此点入座不能造成两者基本功能的破坏；三是具有可供选择的标记，而且最好有两个标记，第一个标记用来确定载体是否在细胞中存在，第二个标记判断外援基因是否已插入。第二个标记区常设在插入点，如果插入成功，这一标记就会破坏（插入失活），由此可判断此基因是否插入。上述两大类载体都具备这些条件，但又各有特点。

质粒是一类不在染色体上且独立存在于细菌细胞质中的环状DNA，能复制自己（自主复制），一般具有抗生素抗性标记。质粒复制的控制基本上有两种类型：单拷贝型和多拷贝型。在一个细胞中，对于单拷贝型质粒来说，一个染色体复制一个质粒；对于多拷贝型质粒来说，一个染色体复制10～50个质粒。此外，还有一种多拷贝型的变型，即不受控制的松弛型质粒，质粒的拷贝（复制）数在一个细胞中可以上千，它作为载体可将携带的外源基因复制成百上千份，此基因编码的蛋白质的总量相应地大幅度提高。它作为载体的优点不言而喻。最常用的质粒是pBR322及其衍生物。

噬菌体是另一类常用载体，它的DNA通常呈线形。噬菌体在离开宿主细菌之前，必须穿上一件保护性外衣，称为蛋白质外壳，DNA藏匿壳中，因为壳的大小有限，所以它所携带的基因总长度受到限制。它的优点是，其DNA比质粒大，外源基因能插入的位点多，所以常用来携带真核生物的各种DNA片段，构建基因库。为此目的，真核DNA一般被切成15 000～20 000个碱基对长度的片段，将它们拼接到噬菌体DNA上，这样，真核DNA产生的所有片段（超过百万）都有可能包含在噬菌体颗粒中，当我们需要某一基因时，则可用与之相应的特异探针将其探测并调离出来。