2.2.2 石蜡切片的主要步骤
1.取材
根据研究的目的决定取材的部位。取材时要考虑切片的方向和定位。如植物的根、茎、叶横切可观察到整体结构，纵切可观察导管和筛管结构；花药常用横切；子房横切可观察胎座的着生位置、胚珠的着生方式等。
2.固定
取新鲜材料，固定在固定液中（配方参见“4.3植物学实验常用试剂的配制”）。常用的固定剂包括FAA固定液、卡诺固定液等，固定液的体积一般为固定材料体积的10～15倍。材料长度一般不超过1 cm，直径在0.5 cm以下。如果材料较大或者通气组织较多，一般还需要抽气，以加速固定液的渗入。
3.脱水
乙醇是石蜡切片最常用的脱水剂，其脱水能力比较强，又可与水以任何比例相混合，还可以硬化组织。需要注意的是，以乙醇作为脱水剂时，应该从较低浓度开始，逐渐增高其浓度，这样可以避免组织快速收缩而发生变形。常规可以从70％乙醇开始，经80％、90％、95％至无水乙醇。脱水时间根据材料大小而定，如材料小于2 mm3时，每级脱水1～3 h。
4.透明
由于常用的脱水剂乙醇不能与石蜡混溶，因此必须使用一种既能与乙醇又能与石蜡相混溶的媒介，把组织中的乙醇取代出来，二甲苯就是这样一种媒介，能与二者相混溶。使用二甲苯替代乙醇时，可发现组织材料的折光性改变，呈透明状态，因此二甲苯又称为透明剂。透明时间的长短因组织的大小而异，最好先投入乙醇和二甲苯等量混合溶液30 min以上，再投入纯二甲苯，并更换一次纯二甲苯，待组织完全透明后进行浸蜡。
5.浸蜡
组织材料经二甲苯透明作用之后，移入熔化的石蜡内浸渍，石蜡逐渐进入组织间隙。
浸蜡需要根据所用石蜡的熔点来定，在恒温箱内进行，一般需要在45～60℃的恒温箱内放置24 h以上，并需要更换石蜡2次。
6.包埋
将已经浸蜡的材料从蜡浴取出，置于充满熔融状态石蜡的纸盒内或包埋板内，使材料和包埋剂融为一体并迅速冷却，这个过程称为包埋。
7.修块和切片
对于迅速冷却后内含材料的包埋板，首先要将包埋的材料分割成块，每块含一个植物样品。取一个分割好的石蜡块，将材料贴在事先准备好的木块上，这样便于修块和切片。蜡块修整的目的是将包埋的材料暴露于蜡块上表面，修整蜡块时只能一点一点地切掉蜡边，否则会使蜡块断裂露出组织。最终修好的蜡块应为基座较宽、上部较狭窄的梯形。
将修好的蜡块固定于切片机头上的夹座内，调整到稍微离开切片刀能够切到的位置上，要注意不要误伤或损坏材料。接下来是对刀，使材料接近刀口，使蜡块组织切面与切片刀口平行，要仔细调整蜡块组织切面使其恰好与刀口接触，然后旋紧刀架，固定好机头，先粗修切片，然后连续切片，用右手转动切片机手轮，左手用毛笔托起蜡片协调地进行切片操作。切下的蜡带用镊子和毛笔轻轻拉直展开，按照次序平铺于蜡片盒中保存。
8.粘片
粘片即将切好的蜡带粘贴到载玻片上的过程。首先将预洗干净并干燥的载玻片涂上明胶粘贴剂，反复涂匀，将载玻片置于43℃恒温台上，在载玻片上添加水。用镊子截取部分蜡带，夹住蜡带的一边，将蜡带铺于载玻片恒温水中，注意蜡带光亮的一面应朝下，立即用毛笔轻轻拉展开，以切片无皱褶为最好。待切片在恒温水内充分摊开展平以后，将载玻片上多余的水吸去，在载玻片上仍有少量水时，用毛笔拨正切片位置。用铅笔在载玻片一端的毛玻璃上写上标本编号。然后置于45℃恒温箱中干燥2d，使蜡带与载玻片结合牢固。或置于60℃恒温箱中干燥2h，蛋白质凝固后即可进行染色。
9.脱蜡与染色
脱蜡是将切片上的石蜡溶解去掉，以便对材料进行染色，染色是使不同组织或细胞不同部位着色，产生不同的折射率，使内部结构更清晰，便于观察。
脱蜡步骤：将切片置于二甲苯中经二甲苯Ⅰ、二甲苯Ⅱ、二甲苯Ⅲ三次脱蜡，每次5 min，可将切片上的石蜡彻底脱除。
过渡：二甲苯与无水乙醇1∶1混合液，5 min。
复水：无水乙醇Ⅰ、无水乙醇Ⅱ、95％乙醇、85％乙醇、70％乙醇、50％乙醇、蒸馏水，每步5 min。
如果材料没有颜色，可以在脱蜡后进行染色，然后经脱水、透明、封片进行观察。
番红染色：置于0.5％～1％番红水溶液中染色2～24 h。
脱水：依次用30％、50％、70％的乙醇脱水，每步5 min。
固绿复染：用0.1％固绿的95％乙醇溶液染色10～40 s。
继续脱水：用95％乙醇洗去多余染液，再用无水乙醇脱水5 min；用无水乙醇和二甲苯混合液处理5 min，用分析纯二甲苯透明处理5 min。
10.封片
切片需要用盖玻片封固后方能进行观察，石蜡切片常用中性树胶、加拿大树胶、大马树胶及人工树脂等封片。其中中性树胶是很好的封固剂，其折射率为1.52，与玻璃的折射率相同，很薄的一层时几乎完全透明。配制中性树胶可用二甲苯调和至刚形成拉滴状，放到玻璃瓶中备用，封固时取一滴中性树胶滴在材料上，封固后的切片可在45℃的恒温箱中过夜干燥。