四、操作步骤
1.称量
牛肉膏蛋白胨培养基：按培养基配方依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨、NaCl，放入烧杯中。牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中进行称量，称量后用热水融化后倒入烧杯。也可放在称量纸上进行称量，称量后直接放入水中。这时如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后即可将纸片取出。
马铃薯葡萄糖培养基：马铃薯先洗净去皮，根据培养基比例适量称取并切成小块，加水煮烂（煮沸20～30 min），用八层纱布过滤得到过滤液，对过滤液进行加热，并在这一过程中将称量好的葡萄糖加入过滤液中，搅拌均匀即配置成培养基。
2.溶解
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解（图1-1）。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积。如果配制固体培养基，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热融化，最后补足所损失的水分。在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%～2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热融化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。
小提示
蛋白胨很易吸湿，在称取时动作要迅速。另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙只用于取一种药品。如若牛角匙数量不够，称取一种药品后，将牛角匙擦干净后，方可再称取另一药品。
图1-1 磁力搅拌加热溶解图
小提示
琼脂融化过程中需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配置培养基时，不可用铜或铁锅加热融化，以免离子进入培养基影响细菌生长。
3.调pH
在调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1 mol/L NaOH，边加边搅拌；反之，用1 mol/L HCl进行调节，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达适宜。对于有些要求pH精确的微生物，其pH的调节可用酸度计进行（使用方法可参考有关说明书）。
4.分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图1-2。
图1-2 培养基分装装置
小提示
培养基灭菌时将培养基的其他成分和琼脂分开灭菌后再混合，或在中性pH条件下先灭菌，灭菌后再按要求调整pH。
（1）液体分装
分装试管的量以试管高度的1/4左右为宜。分装三角烧瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。如果是用于振荡培养，则根据通气量的要求可酌情减少。有的液体培养基在灭菌后，需要补加一定量的其他无菌成分，如抗生素等，添加时装量需准确。
（2）固体分装
分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。
（3）半固体分装
分装时候一般以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。
5.加塞
培养基分装完毕后，在试管口或三角烧瓶口上塞上硅胶塞（或泡沫塑料塞及试管帽等），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，同时保证有良好的通气性。
小提示
分装过程中，注意不要使培养基沾在管（瓶）口上，以免沾污塞子而引起污染。
6.包扎
加塞后，将全部试管用麻绳捆好。再在硅胶塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿硅胶塞，全部完成后，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包封口膜，用麻绳以活结形式扎好，这样方便解开。包扎好后用记号笔注明培养基名称、组别和配制日期等信息。
7.灭菌
将上述培养基在0.103 MPa、121℃、20 min高压蒸汽灭锅中灭菌。
8.搁置斜面
将灭菌的试管培养基冷却至50℃左右（以防斜面上冷凝水太多），将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜（图1-3）。
9.无菌检查
将灭菌培养基放入37℃的温室中培养24～48 h，以检查灭菌是否彻底。
图1-3 摆斜面
思考与讨论
1.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？为什么？
2.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何检查灭菌后的培养基是无菌的？