四、操作步骤
1.微生物纯化——平板划线分离培养法
（1）将接种环火焰灭菌，待冷却后取标本或混合菌液。
（2）用左手持起平板，使平皿盖向上放于台面上或打开平皿盖。
（3）左手打开平板盖持45°倾角，右手持已取材的接种环，在酒精灯上方5～6 cm处做连续划线法分离细菌。划线时，接种环与平板呈30～40°角，轻轻接触平板，以腕力平行滑动接种环，避免将琼脂划破。先在平板上1/5处轻轻涂布，然后即可左右来回以做连续划线接种，线与线间留有适当距离，做到线密而不重复，将整个平板表面布满划线。如果菌量较大可采用分区划线法，可将平皿分为若干个区。每划完一个区域，均将接种环灭菌一次，冷却后再划下一个区域。每个区域的划线均接触上一区域的接种线1～2次，使菌量逐渐减少，以获得单个菌落。
（4）划线完毕，盖好皿，做好标记将平皿倒置，置于37℃培养18～24 h后观察结果。
（5）将培养后长出的单个菌落分别挑取少许细胞接种到培养基上，另外置于37℃温室中培养，待菌苔长出后，检查特征是否一致，同时将细胞涂片后用显微镜检查是否为单一的微生物。若发现有杂菌，需再进行一次分离、纯化，直到获得纯培养。
2.微生物保存——斜面接种法
斜面接种法主要用于划线分离培养所获得的单个菌落的移种，以得到纯种细菌，或保存菌种用于观察细菌的某些培养特性。
具体操作步骤为：
（1）取菌种管置于左手食指、中指、无名指之间，拇指压住管底部上侧面。
（2）用火焰灭菌接种环。
（3）用右手小指与手掌拔取棉塞（如同时持有两管，可用小指与无名指拔取另一棉塞），将管口迅速通过火焰1～2次。
（4）将已灭菌的接种环伸入菌种管中，从斜面上取少许菌，迅速伸入待接种的培养基管中在斜面底部向上划一条直线，然后从底部起向上做曲折连续划线，直至斜面上方顶端，再置于37℃恒温箱中培养18～24 h即可观察结果。
思考与讨论
1.你所做的涂布平板法是否较好地得到了单菌落？如果不是，请分析其原因。
2.简述分离得到的菌落特征。
3.如何确定平板上某个单菌落是纯培养？请写出实验的主要步骤。
技能提升
学习鉴别细菌、真菌、放线菌等微生物的培养形态和显微形态，并绘制镜下形态图。