实训4 常用培养基的配制
一、目的要求
掌握常用培养基的制备过程，学会制备常用培养基。
二、仪器及材料
高压蒸汽灭菌锅、超净台、烧杯、试管、量筒、培养皿、天平、玻璃棒、纱布、牛肉浸膏、蛋白胨、磷酸氢二钾、氯化钠、琼脂、蒸馏水、0.1 mol/L 氢氧化钠溶液、精密pH 试纸等。
三、方法与步骤
1.基础培养基的制备
（1）普通肉汤培养基。称取牛肉浸膏3～5 g、蛋白胨10 g、磷酸氢二钾1 g、氯化钠5 g，加入蒸馏水中充分搅拌溶解（必要时可稍加温促进溶解），配成1 000 mL 培养基。测定和调节pH 值至7.4～7.6，用滤纸过滤，置高压蒸汽灭菌锅内灭菌（0.105 MPa，20 min）后，于超净台内分装于试管内，每管约10 mL，无此设备者可先分装后灭菌。
（2）普通琼脂培养基。取1 000 mL 普通肉汤培养基于烧杯中，加入20～30 g 琼脂，煮沸使琼脂充分融化，趁热用2～4 层纱布过滤，补充蒸馏水至1 000 mL，测定和调节pH 值至7.4～7.6。高压灭菌后无菌分装于试管（装量为1/4～1/3 管）中，趁热斜置（图1.19），冷却即成琼脂斜面；或分装平皿（厚度为2～3 mm）中，水平静置冷却即成琼脂平板。也可先分装于试管中，再进行高压灭菌，然后趁热斜置冷却。
图1.19 培养基的分装装置与棉塞
2.营养培养基的制备
（1）鲜血琼脂培养基。鲜血琼脂培养基也称为血液琼脂培养基。将灭菌后的普通琼脂培养基冷却至45～50 ℃时加入无菌鲜血（每100 mL 普通琼脂中加入鲜血5～6 mL），摇匀后趁热分装于试管中制成斜面，或分装于平皿中制成平面。若温度过高时加入鲜血，则血液变为暗褐色，称为巧克力琼脂。
（2）血清琼脂培养基。方法同鲜血琼脂培养基，每100 mL 普通琼脂中加入血清5～6 mL。
3.其他常用培养基的制备
（1）半固体培养基。制备方法同普通琼脂，只是将琼脂的用量减少为0.5%～0.7%。
（2）马铃薯琼脂培养基。马铃薯200 g，去皮后切成小块，加蒸馏水煮沸30 min，用4 层纱布过滤，加入葡萄糖20 g，融化后补充蒸馏水至1 000 mL，调节pH 值至4.5，灭菌后分装即可。主要用于霉菌和担子菌的分离培养。
（3）麦康凯琼脂培养基。蛋白胨2 g、乳糖1 g、氯化钠0.5 g、胆盐0.5g、1%中性红水溶液0.5 mL，蒸馏水加至1 000 mL。
（4）SS 琼脂培养基。蛋白胨5 g、牛肉浸膏5 g、乳糖10 g、胆盐10 g、枸橼酸钠10～14 g、硫代硫酸钠8.5 g、枸橼酸铁0.5 g、0.5%中性红水溶液4.5 mL、0.1%亮绿溶液0.33 mL、琼脂25～33 g，蒸馏水加至1 000 mL。
4.pH 值测定法
（1）精密pH 试纸法。取该试纸一条浸入欲测的培养基中0.5 s 后取出与标准比色卡比较，如为酸性，滴加1 mol/L 氢氧化钠溶液至pH 值在所需范围之间。在滴加1 mol/L 氢氧化钠溶液时，应充分摇匀，再用试纸测定。
（2）标准比色管法。一般细菌生长的pH 值为7.6～7.8，测定方法如下：
①取大小相同的比色管4 支，每管分别加入不同的溶液：a.培养基管（对照管）加肉汤培养基5 mL；b.标准比色管；c.加有指示剂的培养基管（内装5 mL 肉汤培养基和0.02%酚红指示剂0.25 mL）；d.蒸馏水管。
②对光观察，比较两侧观察孔内颜色是否相同，若培养基为酸性（一般为酸性），则向c管内慢慢滴加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液，每滴一次，将试管内液体摇匀，直至d 两管相加的颜色与ab 两管相同为止。
③记录5 mL 培养基用去滴加0.1 mol/L 氢氧化钠溶液的用量，计算培养基总量中需加滴加1 mol/L 氢氧化钠溶液的用量。