实训13 真菌的形态观察与检疫技术
一、目的要求
（1）掌握观察霉菌形态的基本方法，并观察其形态特征。
（2）掌握常用的霉菌制片方法。
二、仪器及材料
曲霉、青霉、根霉、毛霉、乳酸石炭酸棉蓝染色液、20%甘油、查氏培养基平板、马铃薯培养基、无菌吸管、载玻片、盖玻片、U 形棒、解剖刀、玻璃纸、滤纸等。
三、方法与步骤
1.一般观察法
于洁净载玻片上，滴1 滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落的边缘处取小量带有孢子的菌丝置染色液中，再细心地将菌丝挑散开，然后小心地盖上盖玻片，注意不要产生气泡。置显微镜下先用低倍镜观察，必要时再换高倍镜。
2.载玻片观察法
（1）将略小于培养皿底内径的滤纸放入皿内，再放上“U”形玻棒，其上放一个洁净的载玻片，然后将两个盖玻片分别斜立在载玻片的两端，盖上皿盖，把数套（根据需要而定）如此装置的培养皿叠起，包扎好，用1.05 kg/cm2 121.3 ℃灭菌20 min 或干热灭菌，备用。
（2）将6～7 mL 灭菌的马铃薯葡萄糖培养基倒入直径为9 cm 的灭菌平皿中，待凝固后，用无菌解剖刀切成0.5～1 cm2 的琼脂块，用刀尖铲起琼脂块放在已灭菌的培养皿内的载玻片上，每片上放置2 块。
（3）用灭菌的尖细接种针或装有柄的缝衣针，取（肉眼方能看见的）一点霉菌孢子，轻轻点在琼脂块的边缘上，用无菌镊子夹着立在载玻片旁的盖玻片盖在琼脂块上，再盖上皿盖。
（4）在培养皿的滤纸上，加无菌的20%甘油数毫升，至滤纸湿润即可停加。将培养皿置28 ℃培养一定时间后，取出载玻片置显微镜下观察。
3.玻璃纸透析培养观察法
（1）向霉菌斜面试管中加入5 mL 无菌水，洗下孢子，制成孢子悬液。
（2）用无菌镊子将已灭菌的、直径与培养皿相同的圆形玻璃纸覆盖于查氏培养基平板上。
（3）用1 mL 无菌吸管吸取0.2 mL 孢子悬液于上述玻璃纸平板上，并用无菌玻璃刮棒涂抹均匀。
（4）置28 ℃温室培养48 h 后，取出培养皿，打开皿盖，用镊子将玻璃纸与培养基分开，再用剪刀剪取一小片玻璃纸置载玻片上，用显微镜观察。