任务五　主要动物病原细菌

任务五　主要动物病原细菌

一、猪的常见病原菌

（一）大肠杆菌

大肠杆菌是动物肠道内正常寄生菌，能产生大肠杆菌素，抑制致病性大肠杆菌生长，对机体有利。但在一定条件下，致病性大肠杆菌可引起肠道外感染和肠道感染。

1.生物学特性

（1）形态及染色。大肠杆菌为革兰阴性杆菌，大小为（0.4～0.7） μm×（2～3）μm，两端钝圆，散在或成对。大多数菌株为周身鞭毛和普通菌毛，除少数菌株外，通常无可见荚膜，但常有微荚膜。本菌对碱性染料有良好的着色性，菌体两端偶尔略深染。

（2）培养特性。大肠杆菌为需氧或兼性厌氧菌，在普通培养基上生长良好。最适温度为37 ℃，最适pH 值为7.2～7.4。在普通营养琼脂上培养18～24 h 时，形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色、边缘整齐或不太整齐（运动活泼的菌株）、中等偏大的菌落，直径1～3 mm。在SS 琼脂上一般不生长或生长较差，生长者呈红色。一些致病性菌株（如致仔猪黄痢和水肿病者）在5%绵羊血平板上可产生β 溶血。在麦康凯琼脂上形成红色菌落。普通肉汤培养18～24 h 时，呈均匀浑浊，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌环，培养物常有特殊的粪臭味。

（3）生化特性。大肠杆菌能发酵多种糖类产酸产气。如葡萄糖、麦芽糖、甘露醇等产酸产气；大多数菌株可迅速发酵乳糖；约半数菌株不分解蔗糖；吲哚和甲基红试验均为阳性；VP试验和枸橼酸盐利用试验均为阴性；几乎均不产生硫化氢，不分解尿素。

（4）抵抗力。大肠杆菌耐热，60 ℃加热15 min 仍有部分细菌存活。在自然界生存力较强，土壤、水中可存活数周至数月。5%石炭酸、3%来苏儿等5 min 内可将其杀死。大肠杆菌耐药菌株多，临床中应先进行抗生素敏感试验选择适当的药物以提高疗效。

（5）抗原与变异。大肠杆菌抗原主要有O 抗原、K 抗原和H 抗原3 种，目前已确定的抗原有173 种，K 抗原有80 种，H 抗原有56 种。因此，有人认为自然界中可能存在的大肠杆菌血清型可高达数万种，但致病性大肠杆菌血清型数量是有限的。大肠杆菌的血清型按O∶K∶H 排列形式表示，如O111∶K58（B）∶H12表示该菌具有O 抗原111，B 型K 抗原58，H 抗原12。

2.致病性

根据毒力因子与发病机制的不同，将病原性大肠杆菌分为5 类：产肠毒素大肠杆菌（ETEC）、产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）、肠致病性大肠杆菌（EPEC）、败血性大肠杆菌（SEPEC）及尿道致病性大肠杆菌（UPEC），其中研究最清楚的是前两类。

（1）产肠毒素大肠杆菌。是一类致人和幼畜腹泻最常见的病原性大肠杆菌，其毒力因子为黏附素性菌毛和肠毒素。黏附素性菌毛是ETEC 的一类特有菌毛，它能黏附于宿主肠上皮细胞，故又称其为黏附素或定居因子。目前，在动物ETEC 中已发现的黏附素有F4（K88）、F5（K99）、F6（987P）、F41、F42 和F17。黏附素虽然不是导致宿主腹泻的直接致病因子，但它是构成ETEC 感染的首要毒力因子。肠毒素是ETEC 产生并分泌到细胞外的一种蛋白质性毒素，按其对热的耐受性不同分为不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）两种。LT对热敏感，65 ℃加热30 min 即被灭活；作用于宿主小肠和兔回肠可引起肠液积蓄，对此菌可应用家兔肠袢试验做测定。ST 通常无免疫原性，100 ℃加热30 min 不失活，可透析，能抵抗脂酶、糖化酶和多种蛋白酶作用。对人和猪、牛、羊均有肠毒性，可引起肠腔积液而导致腹泻。

（2）产类志贺毒素大肠杆菌。是一类产生类志贺毒素（SLT）的病原性大肠杆菌。在动物，SLTEC 可致猪的水肿病。引起猪水肿病的SLTEC 有两类毒力因子。黏附性菌毛F18 是猪水肿病SLTEC 菌株的一个重要的毒力因子，它有助于细菌在猪肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。致水肿病2 型类志贺毒素是引起猪水肿病的SLTEC 菌株所产生的一种蛋白质性细胞毒素，导致病猪出现水肿和典型的神经症状。

3.微生物学检验

（1）分离培养。病料直接在血液琼脂平板或麦康凯琼脂平板上划线分离，37 ℃恒温箱培养18～24 h，观察其在各种培养基上的菌落特征和溶血情况。挑取麦康凯平板上的红色菌落或血平板上呈β 溶血（仔猪黄痢与水肿病菌株）的典型菌落几个，分别转到三糖铁培养基和普通琼脂斜面作初步生化鉴定和纯培养。大肠杆菌在三糖铁琼脂斜面上生长，产酸，使斜面部分变黄；穿刺培养，于管底产酸产气，使底层变黄且浑浊；不产生硫化氢。

（2）生化试验分别进行糖发酵试验、吲哚试验、MR 试验、VP 试验、枸橼酸盐试验、硫化氢试验，观察结果。

（3）动物试验取分离菌的纯培养物接种实验动物，观察实验动物的发病情况，并作进一步细菌学检查。

（4）血清学试验在分离鉴定的基础上，通过对毒力因子的检测便可确定其属于何类致病性大肠杆菌，也可以作血清型鉴定。

（二）沙门氏菌

沙门氏菌是一群寄生于人和动物肠道内的革兰阴性无芽孢杆菌，均有致病性，并有极其广泛的动物宿主，是一种重要的人畜共患病的病原。

1.生物学特性

（1）形态及染色。沙门氏菌的形态和染色特性与大肠杆菌相似，呈直杆状，大小为（0.7～1.5）μm×（2.0～5.0）μm，革兰氏阴性菌。除鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌无鞭毛不运动外，其余各菌均为周身鞭毛，能运动，个别菌株可偶尔出现无鞭毛的变种。大多数有普通菌毛，一般无荚膜。

（2）培养特性。沙门氏菌大多数细菌的培养特性与大肠杆菌相似（表1.11）。在肠道杆菌鉴别或选择性培养基上，大多数菌株因不发酵乳糖而形成无色菌落，如远藤氏琼脂和麦康凯琼脂培养时形成无色透明或半透明的菌落；SS 琼脂上产生硫化氢的致病性沙门氏菌菌株，菌落中心呈黑色。与大肠杆菌相似，在培养时易发生S 和R 型变异。培养基中加入硫代硫酸钠、胱氨酸、血清、葡萄糖、脑心浸液和甘油等均有助于本菌生长。

（3）生化特性。绝大多数沙门氏菌发酵糖类时均产气，但伤寒沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌从不产气。正常产气的血清型也可能有不产气的变形。常见沙门氏菌的生化特性见表1.12，大肠杆菌与沙门氏菌生化试验鉴别见表1.13。

（4）抵抗力。本菌的抵抗力中等，与大肠杆菌相似，不同的是亚硒酸盐、煌绿等染料对本菌的抑制作用小于大肠杆菌，故常用其制备选择培养基，有利于分离粪便中的沙门氏菌。

（5）抗原与变异。沙门氏菌具有O 抗原、H 抗原、K 抗原和菌毛4 种抗原。O 抗原和H抗原是其主要抗原，且O 抗原又是每个菌株必有的成分。

①O 抗原。沙门氏菌细胞壁表面的耐热多糖抗原。一个菌体可有几种O 抗原成分，以小写阿拉伯数字表示。

②H 抗原。蛋白质性鞭毛抗原，共有63 种，与H 血清相遇，则在2 h 之内出现疏松、易于摇散的絮状凝集。

③K 抗原。与菌株的毒力有关，故称为Vi 抗原。有Vi 抗原的菌株不被相应的抗O 血清凝集，称为O 不凝集性。Vi 抗原的抗原性弱，刺激机体产生较低效价的抗体。

2.致病性

根据沙门氏菌致病类型的不同，可将其分为3 群。

（1）第1 群是具有高度适应性或专嗜性的沙门氏菌。如鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌仅使鸡和火鸡发病；马流产、牛流产和羊流产等沙门氏菌分别致马、牛、羊的流产等；猪伤寒沙门氏菌仅侵害猪。

（2）第2 群是在一定程度上适应于特定动物的偏嗜性沙门氏菌，仅为个别血清型，如猪霍乱和都柏林沙门氏菌，分别是猪、牛、羊的强适应性菌型，多在各自宿主中致病，但也能感染其他动物。

（3）第3 群是非适应性或泛嗜性沙门氏菌，这群血清型占本属的大多数，鼠伤寒沙门氏菌和肠炎沙门氏菌是其中的突出代表。经常危害人和动物的泛嗜性沙门氏菌20 余种，加上专嗜性和偏嗜性菌在内不过30 余种。

除鸡和雏鸡沙门氏菌外，绝大部分沙门氏菌培养物经口、腹腔或静脉接种小鼠，能使其发病死亡，但致死剂量随接种途径和菌种毒力不同而异。豚鼠和家兔对本菌易感性不及小鼠。

3.微生物学检验

（1）分离培养。对未污染的被检组织可直接在普通琼脂、血琼脂或鉴别培养基平板上划线分离，37 ℃培养12～24 h 后，可获得第一次纯培养。已污染的被检材料先进行增菌培养后再行分离。鉴别培养基常用麦康凯、伊红美蓝、SS 琼脂、HE 等培养基。

（2）生化试验。挑取几个鉴别培养基上的可疑菌落分别纯培养，进行生化特性鉴定。

（3）血清学分型鉴定。将纯培养物用生理盐水洗下来与沙门氏菌因子血清做玻片凝集试验，再用各种单价血清进行分群。在确定O 群以后，则应测定其H 抗原，写出抗原式。

此外，还可用乳胶颗粒凝集试验、ELISA、对流免疫电泳、核酸探针和PCR 等方法进行快速诊断。

（三）葡萄球菌

葡萄球菌广泛分布于空气、饲料、饮水、地面及动物的皮肤、黏膜、肠道、呼吸道及乳腺中。绝大多数不致病，致病性葡萄球菌常引起各种化脓性疾患、败血症或脓毒血症，也可污染食品、饲料，引起中毒。

1.生物学特性

（1）形态及染色。典型的金黄色葡萄球菌为圆形或卵圆形，直径0.5～1.5 μm，排成葡萄串状，无芽孢，无鞭毛，有的形成荚膜或黏液层。革兰氏阳性菌，但衰老、死亡的菌株呈阴性。

（2）培养特性。本菌需氧或兼性厌氧，在普通培养基、血琼脂上生长，麦康凯培养基上不生长。最适生长温度为35～40 ℃，最适pH 值为7.0～7.5。在普通琼脂培养基平板形成湿润、光滑、隆起的圆形菌落，直径1～2 mm。在血液琼脂培养基平板上形成的菌落较大，产溶血素的菌株多为病原菌，在菌落周围呈现明显的β 溶血。

（3）生化特性。触酶阳性，氧化酶阴性，多数能分解乳糖、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸而不产气；致病菌株多能分解甘露醇；能还原硝酸盐，不产生靛基质。

（4）抵抗力。在无芽孢菌中，葡萄球菌的抵抗力较强，常用消毒方法能杀死。浓度为1∶（1 000 000～3 000 000）龙胆紫可抑制其生长繁殖，临床上用1%～3%龙胆紫溶液治疗葡萄球菌引起的化脓症，效果良好。1∶2 000 000 氯己定、消毒净、新洁尔灭和1∶10 000 度米芬可在5 min 内杀死本菌。

（5）抗原葡萄球菌的抗原结构比较复杂，含有多糖和蛋白质两类抗原。

①多糖抗原。具有型特异性。金黄色葡萄球菌的多糖抗原为A 型，表皮葡萄球菌的为B 型。

②蛋白抗原。所有人源菌株都含有葡萄球菌蛋白A（SPA），来自动物源菌株则少见。SPA 能与人、猴、猪、犬及几乎所有哺乳动物的免疫球蛋白的Fc 段非特异结合，结合后的IgG仍能与相应的抗原进行特异性反应。这一现象已广泛应用于免疫学及诊断技术。

2.致病性

葡萄球菌能产生多种酶和毒素。如溶血毒素、血浆凝固酶、耐热核酸酶、肠毒素等，引起畜禽各种化脓性疾病和人的食物中毒。细菌致病力的大小常与这些毒素和酶有一定的关系。

3.微生物学检验

（1）涂片镜检取病料直接涂片、革兰染色镜检。根据细菌形态、排列和染色特性作初步诊断。

（2）分离培养将病料接种于血液琼脂平板，培养后观察其菌落特征、色素形成、有无溶血，菌落涂片染色镜检，菌落呈金黄色，周围呈溶血现象者多为致病菌株。

（3）生化试验纯分离培养菌做生化试验，根据结果判定。

（4）动物试验中家兔最易感，皮下接种24 h 培养物1.0 mL，可引起局部皮肤溃疡坏死。静脉接种0.1～0.5 mL，于24～28 h 死亡；剖检可见浆膜出血，肾、心肌及其他脏器出现大小不等的脓肿。

发生食物中毒时，可将从剩余食物或呕吐物中分离到的葡萄球菌接种到普通肉汤中，于30%CO2 条件下培养40 h，离心沉淀后取上清液，100 ℃30 min 加热后，幼猫静脉或腹腔内注射，15 min～2 h 内出现寒战、呕吐、腹泻等急性症状，表明有肠毒素存在。用ELISA 或DNA 探针可快速检出肠毒素。

（四）链球菌

链球菌种类很多，有些是非致病菌，有些构成人和动物的正常菌群，有些可致人或动物的各种化脓性疾病、肺炎、乳腺炎、败血症等。根据溶血特征可将链球菌分为α 型溶血链球菌、β 型溶血链球菌、γ 型溶血链球菌3 类。α 型溶血链球菌在菌落周围形成不透明的草绿色溶血环，多为条件性致病菌；β 型溶血链球菌菌落周围形成完全透明的溶血环，常引起人及动物的各种疾病；γ 型溶血链球菌菌落周围无溶血现象，一般为非致病菌。

链球菌的抗原结构比较复杂，包括属特异抗原（P 抗原）、群特异抗原（C 抗原）及型特异抗原（表面抗原）。依C 抗原将乙型溶血性链球菌分为A、B、C、D、E、F、G、H、K、I、M、N、O、P、Q、R、S、T、U 共19 个血清群。

1.生物学特性

（1）形态及染色。菌体呈卵圆形，单个或双个存在，在液体培养基中呈链状，不运动，革兰染色阳性。菌落小，呈灰白透明状，稍黏。

（2）培养特性。本菌为兼性厌氧菌。培养基中必须加入血清或血液才能生长。在绵羊血琼脂培养基上培养，菌落周围有α 溶血环，许多菌株在马血琼脂培养基上产生β 溶血。

（3）生化特性。本菌能发酵葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖产酸，不能发酵阿拉伯糖、甘露醇、山梨醇、甘油和核糖。

（4）抵抗力。在水中该菌60 ℃可存活10 min，50 ℃可存活2 h。在4 ℃的动物尸体中可存活6 周。0 ℃的灰尘中可存活1 个月。粪中则可存活3 个月。

2.致病性

链球菌可产生链球菌溶血素、致热外毒素、链激酶、链道酶以及透明质酸酶等各种毒素或酶，可致人及马、牛、猪、羊、犬、猫、鸡等发生多种疾病。C 群和D 群的某些链球菌，常引起猪的急性败血症、脑膜炎、关节炎及肺炎等；E 群主要引起猪淋巴结脓肿；I 群可致猪的败血症、脓毒败血症。我国流行的猪链球菌病是一种急性败血型传染病，病原体属C 群。人也可以感染猪链球菌病。

3.微生物学检验

（1）涂片镜检。取适宜病料涂片，革兰染色镜检，若发现有革兰阳性呈链状排列的球菌，可初步诊断。

（2）分离培养。将病料接种于血液琼脂平板，37 ℃恒温箱培养18～24 h，观察其菌落特征。链球菌形成圆形、隆起、表面光滑、边缘整齐的灰白色小菌落，多数致病菌株形成溶血。

（3）生化试验。取纯培养物分别接种于乳糖、菊糖、甘露醇、山梨醇、水杨苷生化培养基做糖发酵试验，37 ℃恒温箱培养24 h，观察结果。

（4）血清学试验。可使用特异性血清，对所分离的链球菌进行血清学分群和分型。

（五）猪丹毒

猪丹毒杆菌是猪丹毒病的病原体，又称为红斑丹毒丝菌。它也可感染马、山羊、绵羊，引起多发性关节炎；鸡、火鸡感染后出现衰弱和下痢等症状；鸭感染后常呈败血经过，并侵害输卵管，广泛分布于自然界，可寄生于哺乳动物、禽类、昆虫和鱼类等多种动物。

1.生物学特性

（1）形态及染色。本菌为直或稍弯曲的小杆菌，两端钝圆，大小为（0.2～0.4） μm ×（0.8～2.5） μm。病料中细菌常呈单在、堆状或短链排列，易形成长丝状。革兰阳性，在老龄培养物中菌体着色能力差，常呈阴性。无鞭毛，不运动，无荚膜，不产生芽孢。

（2）培养特性。本菌为微需氧菌或兼性厌氧。最适生长温度为30～37 ℃，最适pH 值为7.2～7.6。在普通琼脂培养基和普通肉汤中生长不良。如加入0.5%吐温80、1%葡萄糖或5%～10%血液、血清则生长良好。在血琼脂平皿上经37 ℃24 h 培养可形成湿润、光滑、透明、灰白色、露珠样的小菌落，并形成狭窄的绿色溶血环（α 溶血环）。在麦康凯培养基上不生长。在肉汤中轻度浑浊，不形成菌膜和菌环，有少量颗粒样沉淀，振荡后呈云雾状上升。明胶穿刺生长特殊，沿穿刺线横向四周生长，呈试管刷状，但不液化明胶。

（3）生化特性。氧化酶试验、MR 试验、VP 试验、尿素酶和吲哚试验阴性，能产生硫化氢。在含5%马血清或1%蛋白胨水的糖培养基中可发酵葡萄糖、果糖和乳糖，产酸不产气，不发酵阿拉伯糖、肌醇、麦芽糖、鼠李糖和木糖等。

（4）抵抗力。本菌对腐败和干燥的环境有较强的抵抗力。尸体内可存活几个月，干燥状态下可存活3 周，在经盐腌制的肉内可活3～4 个月。实验室内猪丹毒杆菌培养物，在密封试管中细菌活力能保持2 年，冷冻真空干燥条件下的菌种，30 年后仍然存活。对湿热的抵抗力较弱，70 ℃经5～15 min 可完全杀死。对消毒剂抵抗力不强，1%漂白粉、0.1%升汞、5%石炭酸、5%氢氧化钠、5%甲醛等均可在短时间内杀死本菌。此外，0.1%的过氧乙酸和10%生石灰乳也是目前喷洒或刷墙的较好的消毒剂。本菌可耐0.2%的苯酚，对青霉素很敏感。

（5）抗原与变异。本菌抗原结构复杂，具有耐热抗原和不耐热抗原。根据其对热、酸的稳定性，又可分为型特异性抗原和种特异性抗原。用阿拉伯数字标示型号，用英文小写字母标示亚型。目前已将其分为25 个血清型和1a、1b 与2a、2b 亚型。大多数菌株为1 型和2型。从急性败血症分离的菌株多为1a 亚型，从亚急性及慢性病病例分离的则多为2 型。

2.致病性

在自然条件下，可通过呼吸道或损伤皮肤、黏膜感染，引发3～12 月龄猪发生猪丹毒；3～4 周龄的羔羊发生慢性多发性关节炎；禽类也可感染，鸡呈衰弱和下痢症状，鸭呈败血症症状。实验动物以小鼠和鸽子最易感染。人可经外伤感染，发生皮肤病变，称为“类丹毒”，因为病状与人的丹毒病相似，但后者由化脓链球菌所致。

3.微生物学检验

（1）病料采集。败血型猪丹毒，生前耳静脉采血，死后可采取肾、脾、肝、心血、淋巴结，尸体腐败可采取长骨骨髓；疹块型猪丹毒可采取疹块皮肤；慢性病例，可采心脏瓣膜疣状增生物和肿胀部关节液。

（2）涂片镜检。取上述病料涂片染色镜检。如发现革兰阳性，单在、成对或成丛的纤细的小杆菌，可初步诊断。如慢性病例，可见长丝状菌体。

（3）分离培养。取病料接种于血液琼脂平板，经24～48 h 培养，观察有无针尖状菌落，并在周围呈α 溶血。取此菌落涂片染色镜检，观察形态，进一步明胶穿刺等生化反应鉴定。

（4）动物试验。取病料制成乳剂，对小白鼠皮下注射0.2 mL，或鸽子胸肌注射1 mL，若病料有猪丹毒杆菌，则接种动物于2～5 天死亡。死后取病料涂片镜检或接种培养基进行确诊。

（5）血清学诊断。可用凝集试验、协同凝集试验、免疫荧光法进行诊断。

二、牛羊的常见病原菌

（一）布氏杆菌

布氏杆菌是多种动物和人的布氏杆菌病的病原。本属包括6 个种：马尔他布氏杆菌，也称羊布氏杆菌；流产布氏杆菌，也称牛布氏杆菌；猪布氏杆菌；犬布氏杆菌；沙林布氏杆菌；绵羊布氏杆菌。

1.生物学特性

（1）形态及染色。布氏杆菌呈球形、杆状或短杆形，大小为（0.5～0.7）μm × （0.6～1.5）μm，多单在，很少成双、短链或小堆状。不形成芽孢和荚膜，无鞭毛不运动。革兰染色阴性，吉姆萨染色呈紫色。柯氏法染色本菌呈红色，其他杂菌呈绿色。

（2）培养特性。布氏杆菌专性需氧，但许多菌株，尤其是在初代分离培养时需5%～10%CO2。最适生长温度为37 ℃，最适pH 值为6.6～7.4。在液体培养基中呈轻微浑浊生长，无菌膜。在普通培养基中生长缓慢。加入甘油、葡萄糖、血液、血清等能刺激其生长。自固体培养基上培养2 天后，可见到湿润、闪光、圆形、隆起、边缘整齐的针尖大小的菌落，培养5～7 天，菌落增大到2～3 μm，呈灰黄色。

（3）生化特性。布氏杆菌触酶阳性，氧化酶常为阳性，不水解明胶或浓缩血清，不溶解红细胞，吲哚、甲基红和VP 试验阴性，石蕊牛乳无变化，不利用枸橼酸盐。绵羊布氏杆菌不水解或迟缓水解尿素，其余各种均可水解尿素。

（4）抵抗力。布氏杆菌对外界的抵抗力较强，在阳光直射下可存活4 h，但对湿热的抵抗力不强，煮沸立即死亡。对消毒剂的抵抗力也不强，常用消毒剂能杀死本菌。

（5）抗原。各种布氏杆菌的菌体表面含有两种抗原物质，即M 抗原（羊布氏杆菌抗原）和A 抗原（牛布氏杆菌抗原）。这两种抗原在各个菌株中含量各不相同。如羊布氏杆菌以M 抗原为主，A∶M 约为1∶20；牛布氏杆菌以A 抗原为主，A∶M 约为20∶1；猪布氏杆菌介于两者之间，A∶M 约为2∶1。

2.致病性

布氏杆菌被吞噬细胞吞噬成为胞内寄生菌，并在淋巴结生长繁殖形成感染灶。一旦侵入血流，则出现菌血症。不同种别的布氏杆菌各有一定的宿主动物，如我国流行的3 种布氏杆菌中：马尔他布氏杆菌的自然宿主是绵羊和山羊，也能感染牛、猪、人及其他动物；流产布氏杆菌的自然宿主是牛，也能感染骆驼、绵羊、鹿等动物和人，马和犬是此菌的主要储存宿主；猪布氏杆菌生物型1、2 和3 的自然宿主是猪，生物型4 的自然宿主是驯鹿，生物型2 可自然感染野兔，除生物型2 外，其余生物型也可感染人和犬、马、啮齿类等动物。

3.微生物学检验

（1）细菌学检查。

①涂片镜检。病料直接涂片，做革兰染色和柯兹洛夫斯基染色镜检。

②分离培养。无污染病料可直接划线接种于适宜的培养基；而污染病料用特定的选择性琼脂平板。初次培养应置于5%～10%CO2 环境中，37 ℃培养。每3 天观察1 次，如有细菌生长，可挑选可疑菌落作细菌鉴定；如无细菌生长，可继续培养至30 天后，仍无生长者方可视为阴性。

③动物试验。病料乳剂腹腔或皮下注射感染豚鼠，每只1～2 mL，每隔7～10 天采血检查血清抗体，如凝集价达到1∶50 以上，即认为有感染的可能。

（2）血清学检查。包括血清中的抗体检查和病料中布氏杆菌的检查两大类方法。常用的方法是玻板凝集试验、虎红平板凝集试验、乳汁环状试验、试管凝集试验、补体结合试验等。

（3）变态反应检查。皮肤变态反应一般在感染后的20～25 天出现，因此不宜作早期诊断。此法对慢性病例的检出率较高。

（二）炭疽杆菌

炭疽杆菌是引起人类、各种家畜和野生动物发生炭疽病的病原菌。

1.生物学特性

（1）形态及染色。炭疽杆菌为革兰阳性大杆菌，大小为（1.0～1.2）μm ×（3～5）μm。无鞭毛，呈两端平齐、菌体相连的竹节状。可形成荚膜，在普通培养基上不形成荚膜，但在10%～20%CO2 环境中，于血液、血清琼脂或碳酸氢钠琼脂上，则能形成较明显的荚膜。在培养基上此菌常形成长链，并于18 h 后开始形成芽孢，芽孢椭圆形，位于菌体中央。动物体内炭疽杆菌只有在接触空气之后才能形成芽孢。

（2）培养特性。炭疽杆菌为需氧菌，但在厌氧的条件下也可生长。可生长温度范围为15～40 ℃，最适生长温度为30～37 ℃，最适pH 值为7.2～7.6。在普通琼脂上培养24 h后，强毒菌株形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥、边缘呈卷发状的粗糙（R）菌落，无毒或弱毒菌株形成稍小而隆起、表面为光滑湿润、边缘比较整齐的光滑（S）型菌落。普通肉汤培养基中培养24 h 后，上部液体仍清朗透明，液面无菌膜或菌环形成，管底有白色絮状沉淀，若轻摇试管，则絮状沉淀徐徐上升，卷绕成团而不消散。

（3）生化特性。炭疽杆菌发酵葡萄糖产酸而不产气，不发酵阿拉伯糖、木糖和甘露醇。能水解淀粉、明胶和酪蛋白。VP 试验阳性。不产生吲哚和硫化氢，能还原硝酸盐。牛乳经2～4 h 凝固，然后缓慢胨化。

（4）抵抗力。炭疽杆菌繁殖体的抵抗力不强，60 ℃30～60 min 或75 ℃5～15 min 即可杀死它。常用消毒剂如1∶5 000 氯己定、1∶10 000 新洁尔灭、1∶50 000 度米芬等均能在短时间内将其杀灭。在未解剖的尸体中，细菌可随腐败而迅速崩解死亡。芽孢抵抗力特别大，在干燥状态下可长期存活，煮沸15～25 min、121 ℃灭菌5～10 min 或60 ℃干热灭菌1 h 方可杀死。

2.致病性

炭疽杆菌能致各种家畜、野兽和人类的炭疽，其中牛、绵羊、鹿等易感性最强，马、骆驼、猪、山羊等次之，犬、猫、食肉兽等则有相当大的抵抗力，禽类一般不感染。

炭疽杆菌主要通过消化道传染，也可以经呼吸道、皮肤创伤或吸血昆虫传播。食草动物炭疽常表现为急性败血症，菌体通常要在死前数小时才出现于血流。猪炭疽多表现为慢性的咽部感染，犬、猫和食肉兽则多表现为肠炭疽。

3.微生物学检验

死于炭疽的病畜尸体严禁剖检，只能自耳根部采取血液，必要时可切开肋间采取脾脏。皮肤炭疽可采取病灶水肿液或渗出物，肠炭疽可采取粪便。已经误解剖的畜尸，则可采取脾、肝、心血、肺、脑等组织进行检验。

（1）涂片镜检。病料涂片以碱性美蓝、瑞氏染色或吉姆萨染色法染色镜检，如发现有荚膜的竹节状大杆菌，即可初步诊断；陈旧病料，可以看到“菌影”，确诊还需分离培养。

（2）分离培养。取病料接种于普通琼脂或血液琼脂，37 ℃培养18～24 h，观察有无典型的炭疽杆菌菌落。为了抑制杂菌生长，还可接种于戊烷脒琼脂、溶菌酶-正铁血红素琼脂等炭疽选择性培养基。经37 ℃培养16～20 h 后，挑取纯培养物与芽孢杆菌（如枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌等）鉴别。

（3）生化试验。炭疽杆菌能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、果糖和甘油，不发酵阿拉伯糖、木糖和甘露醇，能水解淀粉、明胶和酪蛋白。VP 试验阳性，不产生靛基质和硫化氢，能还原硝酸盐。牛乳经2～4 天凝固，然后缓慢胨化，不能或微弱还原美蓝。

（4）动物试验。将被检病料或培养物用生理盐水制成1 ∶5 乳悬液，皮下注射小白鼠0.1～0.2 mL，或豚鼠、家兔0.2～0.3 mL。如为炭疽，多在18～72 h 败血症死亡。剖检时可见注射部位呈胶样水肿，脾脏肿大。取血液、脏器涂片镜检，当发现有荚膜的竹节状大杆菌时，即可确诊。

（5）血清学试验

①Ascoli 氏沉淀反应。系Ascoli 于1902 年创立，是用加热抽提待检炭疽菌体多糖抗原与已知抗体进行的沉淀试验。这个诊断方法快速简便，不仅适用于死亡动物的新鲜病料，而且对干的皮毛、陈旧或严重污染杂菌的动物尸体的检查也适用。但此反应的特异性不高，敏感性电较差，因而使用价值受到一定影响。

②间接血凝试验。此法是将炭疽抗血清吸附于炭粉或乳胶上，制成炭粉或乳胶诊断血清。然后采用玻片凝集试验的方法，检查被检样品中是否含有炭疽芽孢。若被检样品每毫升含炭疽芽孢7 万～8 万个，可表现阳性反应。

③协同凝集试验。此法可快速检测炭疽杆菌或病料中的可溶性抗原。将炭疽标本的高压灭菌滤液滴于玻片上，加1 滴含阳性血清的协同试验试剂，混匀后，于2 min 内呈现肉眼可见凝集者，即为阳性反应。

④串珠荧光抗体检查。将串珠试验与荧光抗体法结合起来。即将被检材料接种于含青霉素0.05 IU/mL 的肉汤中培养后，涂片用荧光抗体染色检查。此法与常规检验的符合率达到80%～90%，因而具有一定的实用价值。

⑤琼脂扩散试验。用来检查是否有本菌特异的保护性抗原产生。具体方法是将琼脂培养基上生长的单个菌落。连同周围琼脂一起切取，填入琼脂反应板上事先打好的孔中。与中央孔内于16～18 h 前滴加的抗炭疽免疫血清进行24～48 h 的扩散试验，阳性者有沉淀线。

此外，还可应用酶标葡萄球菌A 蛋白间接染色法和荧光抗体间接染色法等，检测动物体内的炭疽荚膜抗体进行诊断。

（三）梭菌

梭菌为革兰阳性大杆菌，多严格厌氧，少数微需氧，形成芽孢，芽孢直径多大于菌体直径，使菌体呈梭状，故名“梭状芽孢杆菌”，简称梭菌。但不是所有梭菌都呈梭状，如破伤风梭菌。梭菌在自然界广泛分布，常存在于土壤、水、人和动物肠道以及腐败物中，共包括80 余种细菌，多数为腐生菌，少数为病原菌（约11 种）。病原菌通常以产生外毒素和侵袭性酶使动物发病。这里只介绍几种重要的动物病原性梭菌。

1.破伤风梭菌

破伤风梭菌又名破伤风杆菌，是人畜共患破伤风（强直症）的病原菌。污染受伤的皮肤或黏膜，产生强烈的毒素，引起人和动物发病。

（1）生物学特性。

①形态及染色。破伤风梭菌为两端钝网、细长、正直或略弯曲的杆菌，大小为（0.5～1.7）μm×（2.1～18.1）μm，长度变化大。多单在，有时成双，偶有短链。在湿润琼脂表面上，可形成较长的丝状。大多数菌株具周身鞭毛而能运动，无荚膜。芽孢呈圆形，位于菌体一端，横径大于菌体，呈鼓槌状。幼龄培养物为革兰阳性，但培养24 h 以后往往出现阴性染色者。

②培养特性。破伤风梭菌为严格厌氧菌，接触氧后很快死亡。最适生长温度为37 ℃。最适pH 值为7.0～7.5。营养要求不高，在普通培养基中即能生长，菌落透明，有泳动性生长。在血琼脂平板上生长，可形成直径4～6 mm 的菌落，菌落扁平、半透明、灰色，表面粗糙无光泽，边缘不规则，常伴有狭窄的β 溶血环。在一般琼脂表面不易获得单个菌落，扩展成薄膜状覆盖在整个琼脂表面上，边缘呈卷曲细丝状。在厌氧肉肝汤中生长稍微浑浊，有细颗粒状沉淀，有咸臭味，培养48 h 后，在30～38 ℃适宜温度下形成芽孢，温度超过42 ℃时芽孢形成减少或停止。20%胆汁或6.5%NaCl 可抑制其生长。

③生化特性。生化反应不活泼，一般不发酵糖类，只轻微分解葡萄糖，不分解尿素，能液化明胶，产生硫化氢，形成靛青质，不能还原硝酸盐。VP 和MR 试验均为阴性，神经氨酸酶阴性，脱氧核糖核酸酶阳性。

④抵抗力。破伤风梭菌繁殖体抵抗力不强，但其芽孢的抵抗力极强。芽孢在土壤中可存活数十年，湿热80 ℃6 h、90 ℃2～3 h、105 ℃25 min 及120 ℃20 min 可杀死，煮沸10～90 min 致死。干热150 ℃1 h 以上致死芽孢。5%石炭酸、0.1%升汞作用15 h 杀死芽孢。

⑤抗原与变异。破伤风梭菌具有不耐热的鞭毛抗原。用凝集试验可分为10 个血清型，其中第Ⅵ型为无鞭毛不运动的菌株，我国常见的是第Ⅴ型。各型细菌都有一个共同的耐热菌体抗原，均能产生抗原性相同的外毒素，此外，毒素能被任何一个型的抗毒素中和。

（2）致病性。破伤风梭菌芽孢随土壤、污物通过适宜的皮肤黏膜伤口侵入机体时，即可在其中发育繁殖，产生强烈毒素，引发破伤风。此病在健康组织中，于有氧环境下，生长受抑制，而且易被吞噬细胞消灭，如在深而窄的创口。同时创伤内发生组织坏死时，坏死组织能吸收游离氧而形成良好的厌氧环境，或伴有其他需氧菌的混合感染。有利于形成良好的厌氧环境，芽孢转变成细菌，在局部大量繁殖而致病。

破伤风梭菌产生两种毒素，一种为破伤风痉挛毒素，毒力非常强，可引起神经兴奋性的异常增高和肌骼肌痉挛；另一种为破伤风溶血素，不耐热，对氧敏感，可溶解马及家兔的红细胞，其作用可被相应抗血清中和，与破伤风梭菌的致病性无关。破伤风梭菌毒素具有良好的免疫原性，用它制成类毒素可产生坚强的免疫，能非常有效地预防本病的发生。

在自然情况下，破伤风梭菌可感染很多动物。除人易感染外，马属动物的易感染性最高，牛、羊、猪、犬、猫偶有发病，禽类和冷血动物不敏感，幼龄动物比成年动物更敏感。实验动物中，家兔、小鼠、大鼠、豚鼠和猴对破伤风痉挛毒素易感染。

（3）微生物学检验。破伤风具有典型的临床症状，一般不需微生物学诊断。如有特殊需要，可采取创伤部的分泌物或坏死组织进行细菌学检查。另外，还可用患病动物血清或细菌培养滤液进行毒素检查。其方法为：小鼠尾根皮下注射0.5～1.0 mL，观察24 h，看是否出现尾部和后腿强直或全身肌肉痉挛等症状，且不久死产。进一步还可用破伤风抗毒素血清，进行毒素保护试验。

2.气肿疽梭菌

气肿疽梭菌又名黑腿病梭菌，是牛、羊黑腿病病原。两端钝圆杆菌，单在或成双，有芽孢并位于菌体中央或近端而呈汤匙状。厌氧，最适生长温度为37 ℃，最适pH 值为7.2～7.4。普通琼脂上生长不良，血清或血液培养基中生长旺盛。石蕊牛乳中产酸凝同产气。液化明胶，还原硝酸盐，不产生硫化氢，不产生吲哚，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖，不分解甘露醇、水杨苷。常用消毒剂在常用浓度下，可杀死繁殖体。但芽孢的抵抗力很强。6 个月至2岁的牛最敏感，在肌肉丰满的部位发生气性水肿，肌肉呈暗红色或黑色。马、猪、猫、鸡等一般无感染性，人不感染。

3.腐败梭菌

腐败梭菌常经创伤感染致各种家畜恶性水肿，又名恶性水肿梭菌。人体培养的腐败梭菌为细长棒状大杆菌，单在或成双，多为短链，肝触片呈无关节的长丝状。可形成卵圆形芽孢，在菌体近端。无荚膜，有鞭毛。在葡萄糖血琼脂平板上形成半透明、淡灰色或无色、微隆、有不规则柔弱网状分枝从中央向四周延伸的菌落，边缘不齐，弱β 溶血。表面潮湿易融合成片。熟肉基（厌气肉汤）中最初浑浊产气。后形成灰白色块状沉淀，上清清朗，肉块红色。石蕊牛乳中产酸凝固产气。液化明胶，还原硝酸盐，产生硫化氢，不产生吲哚，发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、水杨苷，不分解甘露醇、蔗糖。腐败梭菌可经创伤感染马、牛、绵羊、山羊及猪等多种动物引起恶性水肿，经消化道感染引起羊快疫，鸡偶尔引起坏死性皮炎，人也可感染。

三、禽的常见病原菌

（一）多杀性巴氏杆菌

多杀性巴氏杆菌是多种动物的重要病原菌，对鸡、鸭、鹅、野禽发生禽霍乱，猪发生猪肺疫，牛、羊、马、兔等发生出性败血症。

1.生物学特性

（1）形态及染色。多杀性巴氏杆菌在病变组织中通常为球杆状或短杆状。球杆状或杆状形菌体两端钝圆，大小为（0.2～0.4）μm×（0.5～2.5）μm。单个存在，有时成双排列。病料涂片用瑞氏染色或美蓝染色时，可见典型的两极着色（菌体两端染色深、中间浅）。无鞭毛，不形成芽孢。新分离的强毒菌株有荚膜。革兰染色阴性。

（2）培养特性。多杀性巴氏杆菌为需氧或兼性厌氧菌。最适生长温度为37 ℃，最适pH值为7.2～7.4。对营养要求较严格，用血液琼脂平皿和麦康凯平皿同时分离。在血液琼脂平皿上培养24 h 后，形成灰白色、圆形、湿润、露珠状菌落，不溶血。在血清肉汤中培养，开始轻度浑浊，4～6 天后液体变清亮，管底出现黏稠沉淀，振摇后不分散，表面形成菌环。

（3）生化特性。多杀性巴氏杆菌可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露糖和半乳糖，产酸不产气。大多数菌株可发酵甘露醇、山梨醇和木糖。一般对乳糖、鼠李糖、水杨苷、肌醇、菊糖、侧金盏花醇不发酵。可形成靛基质，触酶和氧化酶均为阳性，MR 试验和VP 试验均为阴性。石蕊牛乳无变化，不液化明胶，产生硫化氢和氨。

（4）抵抗力。多杀性巴氏杆菌抵抗力不强。在阳光中暴晒1 min，在56 ℃15 min 或60 ℃10 min，可被杀死。埋入地下的病死鸡尸，经4 个月仍残留活菌。在干燥空气中2～3天可死亡。3%石炭酸、3%甲醛、10%石灰乳、2%来苏儿、0.5%～1%氢氧化钠等5 min 可杀死本菌。对链霉素、磺胺类及许多新的抗菌药物敏感。

（5）抗原与血清型。多杀性巴氏杆菌主要以其荚膜抗原（K 抗原）和菌体抗原（O 抗原）区分血清型，前者有6 个型，后者有16 个型。以阿拉伯数字表示菌体抗原型，大写英文字母表示荚膜抗原型，我国分离的禽多杀性巴氏杆菌以5∶A 为多，其次为8∶A；猪的以5∶A 和6∶B为主，8∶A 与2∶D 其次；羊的以6∶B 为多；家兔的以7∶A 为主，其次是5∶A。

2.致病性

多杀性巴氏杆菌对鸡、鸭、鹅、野禽、猪、牛、羊、马、兔等都有致病性。急性型表现为出血性败血症并迅速死亡；亚急性型于黏膜关节等部位出现出血性炎症等；慢性型则呈现萎缩性鼻炎（猪、羊）、关节炎及局部化脓性炎症等。

3.微生物学检验

（1）涂片镜检。采取渗出液、心血、肝、脾、淋巴结等病料涂片或触片，以碱性美蓝液或瑞氏染色液染色，如发现典型的两极着色的短杆菌，结合流行病学及剖检变化，即可作初步诊断。

（2）分离培养。用血琼脂平板和麦康凯琼脂同时进行分离培养。麦康凯培养基上不生长，血琼脂平板上生长良好，菌落不溶血。革兰染色为阴性球杆菌。将此菌接种在三糖铁培养基上可生长，并使底部变黄。

（3）动物接种。取1∶10 病料乳剂或24 h 肉汤培养物0.2～0.5 mL。皮下或肌肉注射于小白鼠或家兔，经24～48 h 死亡，死亡剖检观察病变并镜检进行确诊。若要鉴定荚膜抗原和菌体抗原型，则要用抗血清或单克隆抗体进行血清学试验。检测动物血清中的抗体，可用试管凝集、间接凝集、琼脂扩散试验或ELISA。

（二）里氏杆菌

里氏杆菌属的代表种鸭疫里氏杆菌是引起雏鸭、雏火鸡以及雏鹅等多种禽类感染发病的病原。

1.生物学特征

里氏杆菌为革兰阴性短小杆菌，不运动，无芽孢。有的呈长丝状。常呈单在、成双或呈短链状排列。瑞氏染色菌体呈两极浓染，此染色特性与巴氏杆菌极为相似。该菌为厌氧菌，在普通琼脂和麦康凯琼脂上不生长，需要特殊的营养因子。在厌氧培养的鲜血琼脂斜面上，长出有闪光的奶油状小菌落，不出现溶血；在巧克力琼脂平板上长出灰白色、半透明、较黏稠的圆形菌落；在胰酶大豆琼脂上培养形成圆形、凸起、透明、呈露珠样的菌落，用斜射光观察发绿色光。

里氏杆菌不发酵葡萄糖、果糖、木糖、麦芽糖、乳糖、甘露醇、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖，不分解尿素；不产生硫化氢和靛基质；不还原硝酸盐；不利用枸橼酸盐；VP、MR 试验均为阴性，接触酶试验阳性；可产生磷酸酶。在高温或37 ℃下，绝大多数菌株在同体培养基上存活3～4 天，-20 ℃条件下冻干保存可达10 年以上。在肉汤培养物中可存活2～3 周，55 ℃下培养12～16 h，细菌即失去活力。

2.致病性

里氏杆菌主要感染1～8 周龄鸭，尤其是2～3 周龄小鸭，此外也感染鹅和火鸡等禽类。感染后常呈急性或慢性败血症过程，其病变以纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、腑膜炎以及部分病例出现干酪性输卵管炎、结膜炎、关节炎为特征，俗称鸭传染性浆膜炎。发病率为5%～90%，死亡率为1%～80%，甚至高达90%以上，耐过鸭生长迟缓。恶劣的环境条件或并发症，常使禽类更易发生本菌感染。

3.微生物学诊断

里氏杆菌诊断可取病鸭的心血或脑，用巧克力培养基分离细菌，同时接种麦康凯培养基，并进行生化试验，也可接种小鼠试验。里氏杆菌与大肠杆菌和沙门氏菌均可引起浆膜炎病变，诊断时容易混淆，应注意鉴别诊断。

4.预防

里氏杆菌主要采用药物和灭活疫苗来进行防治。免疫接种是控制该病的有效方法。该菌易产生耐药性，发生本病时应先做药敏试验，以选用最敏感的抗菌药物进行防治。