一、外植体接种

取当年生新梢或1年生枝蔓，去掉叶片、叶柄，用肥皂水将表面刷洗干净，并用自来水充分冲洗，然后将其剪成1芽1段，放入干净烧杯，摆进超净工作台。先用70%的酒精冲一下，再用无菌水（用高压锅在120℃下灭菌30min的水）冲洗3～5遍；继而用0.1%的升汞液消毒5～10min，再用无菌水冲洗3～5遍；再用酒精灯火焰消毒过的工具，包括镊子、剪刀、拨针和解剖刀等剥去鳞片和叶柄，取出带数个叶原基的幼芽接入培养基，半包埋即可。

如果外植体所在的环境污染比较严重，外植体接入无菌室这一关比较就难以通过。经常出现外植体的接种全部污染问题时，则可以采用接种茎段法。其操作方法为：取枝条用上述方法消毒后，在无菌条件下剥去外皮层，露出白色内皮层。注意不要使所有接触到消毒枝条的正在用的工具接触白色内皮层部分；换用消毒剪剪掉剥段一头约0.5cm长，扔掉；换干净镊子夹住刚剪过的一端，再剪掉另一端约0.5cm长，将余下最干净的剥段接种于培养基中，半包埋，待愈伤组织产生后长出不定芽，则容易成功；如果接种枝条太粗，可以纵劈成2瓣或3瓣、4瓣后接种，有外内皮层的一面朝下，半嵌入培养基中，有髓的一面朝上，以利于组织吸收营养，长出新组织和不定芽。

【注意】 将接种枝条纵劈的缺点是，不定芽在保持种性方面不太保险，容易发生变异。