二、实验结果
1.T2DM对小鼠骨组织中GPR48表达的影响
由表3-14和图3-8可知，T2DM小鼠造模成功8周后，与ZC组相比，TC组小鼠骨中GPR48 mRNA和蛋白表达均出现显著下调，说明T2DM对骨中GPR48的表达具有显著影响。
表3-14 ZC组与TC组小鼠骨中GPR48 mRNA表达的比较（
）
注：与ZC组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
图3-8 ZC组与TC组小鼠骨中GPR48蛋白的表达
2.T2DM对小鼠骨中TGF-β／BMP信号通路中相关细胞因子表达的影响
从表3-15可知，T2DM小鼠造模成功8周后，用RT-PCR技术检测相关细胞因子在小鼠骨组织中的mRNA表达。结果发现，与ZC组相比，TC组小鼠骨中TGF-β1、Smad1／2／3／4／5、BMP-2／9、OCN、Osx、Runx2、BSP、ALP、Col1和OPN的mRNA表达均出现显著下降（P＜0.05或P＜0.01），而BMP-4和Smad8的mRNA表达虽下调，但差异不具有统计学意义（P＞0.05）。说明T2DM可下调TGF-β／BMP信号通路和下游相关细胞因子的mRNA表达。
表3-15 ZC组与TC组小鼠骨中TGF-β／BMP信号通路相关因子mRNA表达的比较（
）
续 表
注：与ZC组比较，*P＜0．05，**P＜0．01。T2DM为2型糖尿病；TGF-β1为转化生长因子-β；Smad为Smad蛋白；BMP为骨成形蛋白；OC为破骨细胞；Osx为成骨细胞特异性转录因子；Runx2为Runt相关转录因子2；OCN为骨钙素；BSP为骨涎蛋白；ALP为碱性磷酸酶；Col1为Ⅰ型胶原蛋白；OPN为骨桥蛋白。
3.T2DM对小鼠骨中相关细胞因子蛋白表达的影响
图3-9 ZC组与TC组小鼠骨中骨形成相关因子蛋白的表达
图中：Smad为Smad蛋白；p-Smad为磷酸化Smad蛋白；GAPDH为磷酸甘油醛脱氢酶；Col1为Ⅰ型胶原蛋白；OPN为骨桥蛋白。
从图3-9和表3-16可知，与ZC组相比，TC组Smad4／5、p-Smad1／2／3／4／8、Col1（P＜0.01）和OPN的蛋白表达均出现显著变化（P＜0.05或P＜0.01），而Smad1的蛋白表达却未出现显著性变化（P＞0.05）。
表3-16 ZC组与TC组小鼠骨中骨形成相关细胞因子蛋白表达的比较（
）(https://www.daowen.com)
注：与ZC组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
Smad为Smad蛋白；p-Smad为磷酸化Smad蛋白；Col1为Ⅰ型胶原蛋白；OPN为骨桥蛋白。
4.T2DM对诱导分化产生的成骨细胞中相关细胞因子mRNA表达的影响
由表3-17可知，诱导BMSCs分为成骨细胞后，用Trizol收集成骨细胞，然后用RT-PCR技术检测成骨细胞中相关基因的mRNA表达，发现与ZC组相比，TC组成骨细胞中GPR48、ALP、Runx2、Osx、DMP1和SOST的mRNA表达均呈现显著性下调（P＜0.05或P＜0.01），PHEX（P＞0.05）的mRNA表达呈下调趋势，但差异不具有统计学意义（P＞0.05）。提示T2DM可影响诱导分化产生的成骨细胞中相关细胞因子的表达。
表3-17 ZC组与TC组小鼠成骨细胞中细胞因子mRNA表达的比较（
）
续 表
注：与ZC组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。GPR48为G蛋白偶联受体48；ALP为碱性磷酸酶；Runx2为Runt相关转录因子2；Osx为成骨细胞特异性转录因子；DMP1为骨基质酸性蛋白；PHEX为磷酸调控内肽酶同源物；SOST为骨硬化蛋白。
5.T2DM对小鼠成骨细胞分化及成骨能力的影响
T2DM小鼠造模成功8周后，利用细胞原代培养并诱导BMSCs向成骨细胞分化，然后用ALP、茜素红和Von Kossa 3种染色方法对成骨细胞进行染色（见图3-10，彩图见附录）。结果显示，与ZC组相比，TC组的碱性磷酸酶（ALP）染色结果、茜素红染色结果和Von Kossa染色结果均出现显著下降，说明分化产生的成骨细胞活性和骨形成能力出现显著下降。
图3-10 ZC组与TC组小鼠成骨细胞分化及成骨能力的比较
6.T2DM对小鼠BMSC向脂肪细胞分化的影响
由图3-11（彩图见附录）所示可知，患T2DM小鼠造模成功8周后，与ZC组相比，TC组小鼠BMSCs分化产生的脂肪细胞显著增多，说明T2DM促进小鼠BMSCs向脂肪细胞分化。
图3-11 ZC组与TC组小鼠脂肪细胞分化的比较（×10）
7.T2DM对小鼠骨形成能力的影响
T2DM小鼠造模成功8周后，取处理好的小鼠颅骨分别进行茜素红和ALP染色（颜色越深表示骨形成能力越强）。由图3-12（彩图见附录）所示得知，ZC组小鼠颅骨的骨形成能力显著高于TC组小鼠，说明TC组小鼠的骨形成能力出现显著下降。