二、实验结果
1.T2DM对骨GPR48表达的影响
从分析表3-23和图3-13可知，T2DM造模成功8周后，与ZC组相比，TC组小鼠骨中GPR48 mRNA和蛋白表达均显著下调，说明T2DM对骨中GPR48的表达具有显著影响。
表3-23 ZC组与TC组小鼠骨GPR48表达的比较（
）
注：与ZC组比较，**P＜0.01。
图3-13 小鼠骨中GPR48蛋白的表达
2.T2DM对IP3和Ca2＋浓度的影响
由表3-24可知，采用ELISA法对ZC组和TC组血清中IP3和Ca2＋浓度进行检测，结果显示与ZC组相比，TC组小鼠血清中IP3和Ca2＋浓度均出现显著升高（P＜0.05）。
表3-24 ZC组与TC组IP3和Ca2＋浓度的比较（
）
注：与ZC组比较，*P＜0.05。
3.T2DM对骨中相关细胞因子mRNA表达的影响
由表3-25可知，T2DM小鼠造模成功8周后，采用RT-PCR对骨组织中相关细胞因子的mRNA表达进行检测，发现与ZC组相比，TC组小鼠骨中OPG和RANKL的mRNA表达均显著下调，而RANK、TRAF6、CN、Src-3、PLC、NFATc2、NFATc1、TRAP、c-fos、AP-1、CTSK和PU.1的mRNA表达均出现显著上调（P＜0.05或P＜0.01），而Src-1的mRNA表达却不具有显著性差异（P＞0.05）。说明T2DM可显著激活OPG／RANKL／RANK分子轴和CN／NFAT信号通路以及下游相关细胞因子的mRNA表达。
表3-25 ZC组与TC组小鼠骨中骨吸收细胞因子mRNA表达的比较（
）
注：与ZC组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。OPG为骨保护素；RANKL为核因子κB受体活化因子配体；TRAF6为泛素连接酶；Src为非受体酪氨酸激酶c；PLC为磷脂酶C；CN为钙调磷酸酶；NFATc为活化t-细胞核因子；AP-1为激活蛋白-1；c-fos为原癌基因；TRAP为抗酒石酸酸性磷酸酶；CTSK为组织蛋白酶K；PU.1为Spi-1原致肿瘤基因。
4.T2DM对骨组织中骨吸收相关细胞因子蛋白表达的影响
由图3-14和表3-26可知，与ZC组相比，TC组RANKL、RANK、c-fos、c-Src和TRAF6的蛋白表达均出现显著变化（P＜0.05或P＜0.01）。
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图3-14 ZC组与TC组小鼠骨吸收相关细胞因子蛋白的表达
注：RANKL为核因子κB受体活化因子配体；β-actin为β-肌动蛋白；RANK为NF-κB活化受体因子；GAPDH为磷酸甘油醛脱氢酶；c-fos为原癌基因；c-Src为细胞癌基因；TRAF6为泛素连接酶。
表3-26 ZC组与TC组小鼠骨吸收相关细胞因子蛋白表达的比较（
）
注：与ZC组相比，*P＜0.05，**P＜0.01。RANKL为核因子κB受体活化因子配体；RANK为NF-κB活化受体因子；c-fos为原癌基因；c-Src为细胞癌基因；TRAF6为泛素连接酶。
5.T2DM对小鼠破骨细胞分化的影响
由图3-15所示得知，T2DM造模成功8周后，与ZC组相比，TC组小鼠BMM分化产生的破骨细胞数量显著增多，且每个破骨细胞含有超过10个核的数量增多。说明T2DM促进BMM向破骨细胞分化产生以及多核化。
分析表3-27可知，取T2DM和普通小鼠骨髓巨噬细胞（bone marrow macrophages，BMM）后做原代培养，并利用M-CSF和RANKL诱导其向破骨细胞进行分化，在分化的第4天取破骨细胞，利用RT-PCR技术检测破骨细胞中相关细胞因子mRNA表达，发现与ZC组相比，TC组GPR48 mRNA表达显著下调，而TRAP和NFATc1的mRNA表达均出现显著上调（P＜0.05或P＜0.01），而PU.1、c-fos和c-Src的mRNA表达呈上调趋势但不具有显著性差异（P＞0.05）。
图3-15 ZC组与TC组小鼠分化产生的破骨细胞
表3-27 ZC组与TC组小鼠分化产生的破骨细胞中相关细胞因子mRNA表达的比较（
）
续 表
注：与ZC组相比，*P＜0.05。GPR48为G蛋白偶联受体48；TRAP为抗酒石酸酸性磷酸酶；NFATc1为活化t-细胞核因子1；PU.1为Spi-1原致肿瘤基因；c-fos为原癌基因；c-Src为细胞癌基因。
6.T2DM对小鼠颅骨和股骨TRAP活性的影响
由图3-16所示可知，T2DM小鼠造模成功8周后，采用TRAP染液对股骨石蜡切片和颅骨进行染色，结果发现与ZC组相比，TC组小鼠股骨和颅骨的TRAP染色结果均显著增强。说明T2DM可显著增强小鼠的骨吸收能力。
图3-16 ZC组与TC组小鼠股骨和颅骨TRAP染色结果