三、实验内容
（一）实验材料与仪器
1.材料
主要有维生素C、碳酸氢钠、乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na）、焦亚硫酸钠、针用炭、注射用水、亚甲蓝、乙酸乙酯、乙醇、醋酸、碘、淀粉、葡萄糖、盐酸等。
2.仪器
主要有分析天平、烧杯（100 mL、200 mL）、G3垂熔漏斗、5 mL注射器、0.45 μm微孔滤膜、灌注器、pH测定、仪硅胶GF254薄层板、三用紫外分析仪、紫外-可见分光光度计、滴定管、高压灭菌锅、旋光光度计等。
（二）实验部分
1.5%维生素C注射液的制备（5%vitamin C injection）
【处方】
5%维生素C注射液处方见表4-1。
表4-1 5%维生素C注射液处方
【制备】
（1）注射用水的处理：取注射用水120 mL，煮沸，放冷至室温，或通入二氧化碳（20～30 min）使其饱和，以除去溶解在其中的氧气，备用。
（2）溶解：取75 mL注射用水，加入处方量EDTA-Na、维生素C、焦亚硫酸钠搅拌使之溶解。
（3）调pH值：分次缓慢加入少量碳酸氢钠固体2～2.5 g，不断搅拌至完全溶解，继续搅拌至无气泡产生，调节药液pH值至5.8～6.2。
（4）吸附：加0.1 g针用炭，室温搅拌10 min。
（5）过滤：用滤纸过滤除去针用炭。
（6）补液与灌封：加用二氧化碳饱和的注射用水至全量，用G3垂熔漏斗预滤，再用0.45 μm孔径的微孔滤膜精滤，检查滤液澄明度，合格后即可灌装。在灌装前先调节灌注器装量，按药典规定适当增加装量，以保证注射液用量不少于标示装量，5 mL/支。
（7）熔封：熔封时要求火焰细而有力，燃烧完全。单焰灯在黄蓝两层火焰交界处温度最高；双焰灯的两火焰应有一定夹角，火焰交点处温度最高。
（8）灭菌与检漏：100℃灭菌15 min。将安瓿放入加有亚甲蓝的水中，挑出药液被染色的安瓿，将检漏合格的安瓿外表面擦干，即得注射剂试制成品。
【注解】
（1）适应证及用法：主要用于防治坏血病，也可用于各种急慢性传染病及紫癜等辅助治疗；注射给药。
（2）配液时注意将碳酸氢钠撒入维生素C溶液中的速度，不宜过快，以防产生的气泡使溶液溢出，同时要不断搅拌，以免局部碱性过强，破坏药物。
（3）维生素C容易氧化，致使含量下降，颜色变黄，金属离子会加速这一过程。故在处方中加入抗氧剂，并在灌封时通入二氧化碳。
（4）维生素C在高压高温环境中易氧化，按照湿热高压灭菌方法会破坏药物。因此，调整灭菌压力温度和时间分别为100℃、15 min。
（5）灌装要求药液不沾安瓿颈壁，以免熔封时焦头。熔封时可将颈部放于火焰温度最高处，待顶部烧红时及时熔封，快拉慢压可以防止焦头。熔封后的安瓿顶部应圆滑、无尖头或鼓泡等现象。
【质量检查】
（1）性状：无色至微黄色的澄明液体。
（2）装量：按《中国药典》2015年版四部通则0102检查方法进行，5 mL/支，可多加0.3 mL，每支装量均不得少于其标示装量。
（3）澄明度：按《中国药典》2015年版四部通则0902进行。
（4）鉴别：
①取本品，用注射用水稀释成含维生素C 10 mg/mL的溶液。取4 mL，加0.1 mol/L的盐酸溶液4 mL，混匀，加0.05%亚甲蓝乙醇溶液4滴，置40°C水浴中加热，3 min内溶液应由深蓝色变为浅蓝色或完全褪色。
②取本品，用注射用水稀释成含维生素C 1 mg/mL的溶液作为供试品溶液；另取维生素C对照品，加注射用水溶解并稀释成1 mg/mL的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部通则0502）实验，吸取上述两种溶液各20 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-乙醇-水（5∶4∶1）为展开剂，展开、晾干，立即置紫外光灯（254 nm）下检视。供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液一致。
（5）检查：
①pH值：应为5.0～7.0（《中国药典》2015年版四部通则0631）。
②颜色：取本品，1 mL中含维生素C 50 mg的溶液，按照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2015年版四部通则0401），在420 nm的波长处测定，吸光度不得超过0.06。
③草酸：取本品，1 mL中约含维生素C 50 mg的溶液，精密量取5 mL，加稀醋酸1 mL与氯化钙试液0.5 mL摇匀，放置1 h作为供试品溶液；精密称取草酸75 mg，置500 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5 mL，加稀醋酸1 mL与氯化钙试液0.5 mL，摇匀，放置1 h作为对照溶液。供试品溶液产生的浑浊度不得浓于对照溶液（0.3%）。
④细菌内毒素：取本品，依法检查（《中国药典》2015年版四部通则1143），1 mg维生素C中含内毒素量应小于0.020 EU。
⑤无菌：按无菌检查法项下检查，应符合规定（《中国药典》2015年版四部通则1101）。
⑥其他：应符合注射剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版四部通则0102）。
（6）含量测定：精密量取本品适量（约相当于维生素C 0.2 g），加水15 mL与丙酮2 mL，摇匀，放置5 min，加稀醋酸4 mL与淀粉指示液1 mL，用碘滴定液（0.05 mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30 s不褪。1 mL碘滴定液（0.05 mol/L）相当于8.806 mg的维生素C。
2.葡萄糖注射液的制备（glucose injection）
【处方】
葡萄糖注射液处方见表4-2。
表4-2 葡萄糖注射液处方
【制备】
（1）输液瓶的处理：先用水冲洗，再用2%氢氧化钠溶液（50～60℃）浸泡并刷洗，再用水冲洗至中性，最后用蒸馏水或去离子水冲洗。临用前尚需用注射用水冲洗两次。忌用旧瓶。
（2）橡皮塞处理：橡皮塞先用水搓洗，用0.5%～1%氢氧化钠溶液煮沸约30 min，热水洗净，再用0.5%～1%盐酸煮沸约30 min，用水洗净盐酸，用蒸馏水或去离子水漂洗并煮沸30 min，临用前再用注射用水至少洗3次。
（3）涤纶膜的处理：将涤纶膜用75%～95%乙醇浸洗或用注射用水煮沸30 min，再用注射用水反复漂洗至漂洗后的注射用水澄明无异物为止。
（4）配制：按处方量称取葡萄糖，加适量热注射用水溶解，配成50%～60%的浓溶液，用盐酸调pH值至4.5左右，加上述浓溶液的0.1%～0.3%（g/mL）针用活性炭，搅匀、加热煮沸15 min，趁热过滤除炭。滤液加注射用水至配制量，测pH及含量，合格品用适宜滤器预滤，最后用微孔滤膜（0.45 μm）过滤，检查澄明度，合格后即可灌装。
（5）灌装：输液瓶临用前用新鲜注射用水冲洗两次。将质量检查合格的滤液立即灌装，并随即用漂洗合格的涤纶膜盖好，加橡皮塞、铝帽封口。
（6）灭菌与检漏：灌封好的输液应及时在115℃热压下灭菌30 min。灭菌过程应严格按照操作规程，预热时排尽锅内空气再使温度上升，并控制好灭菌温度和时间。灭菌结束立即停止加热，并缓慢放气使压力表指针回复至零，温度表降温至90℃以下，开启锅盖，取出输液，冷至50℃，将药瓶轻轻倒置，不得有漏气现象。本工序应特别注意安全。
【注解】
（1）适应证及用法：本品可补充能量和体液；注射或口服。
（2）原辅料的质量、针用活性炭，以及包装用的输液瓶、橡皮塞、涤纶膜等是注射液澄明度、热原和霉菌不合格的主要因素，使用前务必达标。
（3）本品易发霉变质，供静脉滴注用量大，故在全部制备过程应严防污染，灭菌要彻底。
（4）输液的过滤要求：滤速快、澄明度好。过滤除炭时，要防止漏炭。预滤常用砂滤棒、垂熔玻璃漏斗，用微孔滤膜作为终端滤器；也可采用单向复合膜滤器一次过滤完成除炭、预滤和精滤。
（5）灭菌温度超过120℃，时间超过30 min，溶液开始变黄，色泽的深浅与5-羟基糠醛产生的量成正比，故应注意灭菌温度和时间。灭菌完毕后，要特别注意在降温降压后才能开启锅盖。
（6）葡萄糖溶液经灭菌后，常使pH值下降。研究表明该溶液pH值先调节至5左右，再加热灭菌较为稳定，变色最浅，且能符合药典规定的pH值。
【质量检查】
（1）澄明度：按《中国药典》2015年版四部通则0902附录注射剂澄明度检查的规定检查，应符合规定。不溶性微粒的检查是将澄明度检查合格的输液1瓶，按《中国药典》2015年版四部通则0903方法检查，应符合规定，即1 mL注射剂中含10 μm以上的微粒不得超过20粒，含20 μm以上微粒不得超过2粒。
（2）pH值：应为3.2～5.5。注意灭菌前后pH变化（《中国药典》2015年版四部通则0631）。
（3）细菌内毒素：取本品按细菌内毒素检查法的规定检查，应为阴性。若为阳性时，应再做热原检查（《中国药典》2015年版四部通则1143）。
（4）热原：取本品依法检查（《中国药典》2015年版四部通则1142）。
（5）含量测定：按《中国药典》2015年版四部通则0621方法测定旋光度，并计算含量。
（6）其他：应符合注射剂项下有关规定（《中国药典》2015年版四部通则0102）。