三、实验内容
（一）材料与仪器
1.材料：氯霉素、硼砂、硼酸、尼泊金乙酯、硝酸毛果芸香碱、无水磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠、硫柳汞等。
2.仪器：分析天平、烧杯（100 mL、200 mL）、微孔滤膜、G3垂熔漏斗、输液瓶、眼药瓶、灌注器、灭菌器、pH测定仪、澄明度检查仪、无菌操作柜、渗透压仪、高效液相色谱仪。
（二）实验部分
1.氯霉素滴眼剂的制备（chloramphenicol eye drops）
【处方】
氯霉素滴眼剂处方见表5-1。
表5-1 氯霉素滴眼剂处方
【制备】
（1）塑料眼药瓶可用75%乙醇消毒，再用滤过的无菌蒸馏水洗至无醇味，沥干备用。若包装完好，经抽样做无菌检查合格者，也可直接使用。
（2）无菌操作柜用新洁尔灭（稀释1000倍）消毒，也可用75%乙醇抹净，用甲醛棉球蒸气灭菌1～2 h，备用。操作者的手要先用肥皂洗净后，用新洁尔灭溶液或0.5%甲酚皂溶液浸泡1 min。
（3）配制：称取1.90 g硼酸、0.03 g硼砂溶于约90 mL的热蒸馏水中，然后加入0.25 g氯霉素与0.03 g尼泊金乙酯，搅拌溶解，补足水量100 mL。测定pH值合格后，用G3垂熔漏斗过滤至澄明，滤液灌装于洁净的输液瓶中，100℃流通蒸气灭菌30 min。
（4）无菌分装：戴上经消毒灭菌的袖套，伸入无菌操作柜内，将灭菌的氯霉素溶液分装于眼药瓶中，加塞，即得氯霉素滴眼液。
【注解】
（1）适应证及用法：治疗由大肠杆菌、流感嗜血杆菌、克雷伯菌属、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌和其他敏感菌所致眼部感染；滴于眼睑内。
（2）氯霉素在25℃时，水中溶解度为1∶400。配制时用热蒸馏水溶解，并加硼砂增加氯霉素在水中的溶解度。
（3）氯霉素在弱酸或中性（pH=4.5～7.5）溶液中较稳定，在pH值为6时最稳定。因它可被磷酸盐、醋酸盐和枸橼酸盐等催化水解，因此常用硼酸盐缓冲液制备。
（4）氯霉素滴眼液在贮藏过程中，效价逐渐降低，故配液时适当提高投料量，使在有效贮藏期间，效价能保持在规定范围以内。
（5）氯霉素对热较稳定，配液时可加热以加速溶解，也可用100℃流通蒸气灭菌。本品也可用硝酸苯汞（0.005%，g/mL）或尼泊金甲酯（0.02%，g/mL）作为抑菌剂。尼泊金甲酯要在热蒸馏水中溶解。
【质量检查】
（1）性状：无色至微黄绿色的澄明液体。
（2）鉴别：
①取本品4 mL，参照《中国药典》2015年版二部氯霉素项下的鉴别（1）实验，显示相同的反应。
②在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
（3）检查：
①pH值应为6.0～7.0（《中国药典》2015年版四部通则0631）。
②有关物质：精密量取本品适量，用含量测定项下的流动相A∶流动相B（68∶32）定量稀释成1 mL中约含氯霉素0.5 mg的溶液，作为供试品溶液；另取氯霉素对照品、氯霉素二醇物对照品、对硝基苯甲醛对照品、羟苯乙酯对照品各适量，加甲醇适量（每10 mg氯霉素加甲醇1 mL）使其溶解，用上述流动相定量稀释至1 mL中约含氯霉素0.5 mg、氯霉素二醇物40 μg、对硝基苯甲醛3 μg、羟苯乙酯50 μg的混合溶液，作为对照品溶液。参照含量测定项下的色谱条件，精密量取供试品溶液与对照品溶液各10 μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，含氯霉素二醇物不得超过标示量的8.0%，含对硝基苯甲醛不得超过标示量的0.5%。羟苯乙酯在有关物质项下记录的色谱图中，按外标法以峰面积计算含量，应为标示量的80.0%～120.0%。
③渗透压摩尔浓度应为250～350 mOsmol/kg（《中国药典》2015年版四部通则0632）。
④其他应符合眼用制剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版四部通则0105）。
（4）含量测定：
按照高效液相色谱法测定（《中国药典》2015年版四部通则0512）。
①色谱条件与系统适用性：实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为0.01 mol/L庚烷磺酸钠缓冲溶液（取磷酸二氢钾6.8 g，用0.01 mol/L庚烷磺酸钠溶液溶解并稀释至1000 mL，再加三乙胺5 mL，混匀，用磷酸调节pH值至2.5），流动相B为甲醇；检测波长为277 nm，按表5-2进行线性梯度洗脱。取有关物质项下的混合对照品溶液10 μL注入色谱仪，记录色谱图，各相邻峰间的分离度均应符合要求。
表5-2 流动相线性梯度洗脱程序
②测定法：精密量取本品适量，用流动相（68∶32）定量稀释制成1 mL中约含氯霉素0.1 mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另外，精密称取氯霉素对照品适量，同法测定。按外标法以峰面积计算供试品中氯霉素的含量。
2.硝酸毛果芸香碱滴眼剂（nitric piroca eye drops）
【处方】
硝酸毛果芸香碱滴眼剂处方见表5-3。
表5-3 硝酸毛果芸香碱滴眼剂处方
【制备】
（1）磷酸缓冲溶液的配制：称取1.12 g无水磷酸二氢钠和0.07 g无水磷酸氢二钠，加蒸馏水至200 mL，溶解，过滤，装于锥形瓶中，用纸包裹后热压灭菌（121℃，灭菌20 min）备用。
（2）眼用溶液的配制：按无菌操作将硝酸毛果芸香碱2 g溶于已灭菌的磷酸缓冲液中。取其中150 mL药液，加入硫柳汞30 mg使之溶解。用G3垂熔漏斗过滤，将100 mL药液无菌分装于已灭菌的眼药瓶中，每支10 mL。
【注解】
（1）适应证与用法：缩瞳药，治疗原发性青光眼；滴于眼睑内。
（2）硝酸毛果芸香碱在碱性溶液中不稳定，内酯环易破坏，故用磷酸缓冲液调节成酸性，以增强药物的稳定性。
【质量检查】
（1）澄明度：按《中国药典》2015年版四部通则0902方法检查，应符合规定。
（2）pH值：按《中国药典》2015年版四部通则0631方法测定，应符合规定。
（3）渗透压：计算滴眼剂是否等渗，或用渗透压仪进行测定（《中国药典》2015年版四部通则0632），应符合规定。
（4）无菌检查：检查方法见附录（《中国药典》2015年版四部通则1101），应符合规定。
（5）其他：应符合眼用制剂项下有关的各项规定（《中国药典》2015年版四部通则0105）。