高效液相色谱仪（仪器简介、操作规程及注意事项）
1.仪器简介
高效液相色谱仪系统是由贮液器、输液泵、进样器、柱温箱、检测器、控制及数据处理系统组成（如附图4所示）。贮液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸附的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
附图4高效液相色谱仪组成示意图
2.操作规程
（1）开机
①打开电脑，登录Windows操作系统。
②打开液相色谱仪各个模块的电源：对分体式，请按输液泵→进样器→柱温箱→检测器的顺序打开开关。
③待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开化学工作站，进行输液泵与色谱工作站的连接。
④把各流动相放入溶剂瓶中。
⑤旋开排气阀，将输液泵流量设到5 mL/min，溶剂A设到100%，打开输液泵，排除管线中的气体2～3 min，直到管线内由溶剂瓶到输液泵入口无气泡为止，查看柱前压力。依次切换到B、C、D溶剂分别排气。
⑥将泵的流量设到0.5 mL/min，多元泵则再设定溶剂配比，如A=80%，B=20%；关闭排气阀（顺时针）。
⑦将泵的流量设到0.8 mL/min，2 min后将泵的流量设到1 mL/min，冲洗色谱柱20～30min。
⑧将冲洗液换成流动相，待柱前压力基本稳定后，打开检测器灯，观察基线情况。
⑨自动进样先放置样品，设置运行方法，进行检测；手动进样先设置运行方法，再注射进样检测。
（2）关机
①关机前，用95%水冲洗柱子和系统0.5～1 h，流量0.5～1 mL/min，再用100%有机溶剂冲0.5 h，然后关泵。
②退出化学工作站及其他窗口，关闭计算机。
③关掉主机电源开关。
3.注意事项
（1）规范操作，树立保护HPLC整套系统的概念，尤其对于输液泵、色谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或损坏。
（2）氘灯是易耗品，应最后开灯，不分析样品即关灯。
（3）流动相使用前必须过滤，不要使用多日存放的蒸馏水（易长菌），严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。
（4）流动相使用前必须进行脱气处理，可用超声波振荡10～15 min。
（5）配制90%水+10%异丙醇，以每分钟2～3滴的速度虹吸排出，清洗柱塞杆，溶剂不能干涸。
（6）流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式。启动泵时，应在2 min之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然（流速递减）；切忌流速的骤变。
（7）当流动相含有缓冲液时，要用纯化水冲洗手动进样器进样口，同时搬动进样阀数次。
（8）柱子存放时，需填充少量乙腈或甲醇，两端堵头封存；每一个月重新使用乙腈或甲醇，填充封存。