可寻址激光珠免疫分析法

可寻址激光珠免疫分析法（addressable laser bead immunoassay，ALBIA）又称流式荧光法，是基于编码微球和流式技术的一种高通量发光检测技术，近年来逐渐用于自身抗体的检测。

检测原理

1.点阵磁珠设置·将两种荧光分类染料按不同比例注入磁珠，获得不同颜色的磁珠，以达到同时检测多种分析物。每种颜色的磁珠表面包被特定检测专用的配体，用于捕获并检测样本中特定的分析物。当目标分析物被对应磁珠捕获，对应的荧光结合物会发出不同于磁珠原有颜色的荧光信号。探测器检测到这些信号后，根据信号强弱，分析特定分析物对应浓度。

2.免疫反应原理·每个磁珠表面包被对应自身抗原，当其与患者样本，以及样本稀释液在37℃下混合后，目标分析物结合至磁珠表面。经过孵育时间后，用磁体固定磁珠，将混合液吸去。然后反复洗涤后，去除未结合的底物。最后加入荧光探针结合物来捕获特异性结合的分析物。再一次经过孵育和洗涤后，探测器检测磁珠的荧光信号。仪器通过荧光信号来识别特异性结合的分析物。

3.流式探测技术·反应结束后，探测器检测磁珠荧光。检测方法与传统流式细胞分析仪中检测荧光标记细胞的方法相似（图1—2—8）。磁珠以单列纵队流过鞘液内的流动腔，接受两个激光器的检测。第一个激光器产生红色的638nm分类激光，激发磁珠表面嵌入的分类染料，然后对激发的复合信号进行解读，用于识别磁珠的分类；另一个激光器产生绿色的532nm报告激光，激发荧光探针，然后将测得的信号与分类激光生成的分类数据相关联，用于识别样本反应所激发的荧光报告信号。系统软件将荧光报告信号转化为相对荧光强度值，然后对比内标磁珠的固有荧光报告值，转化为荧光比率。荧光比率与检测特异性校准曲线对比后，分析得到相应分析物的浓度。

图1—2—7　化学发光法检测抗核抗体反应原理图

A.样本加入抗原包被的磁珠；B.样本与抗原包被的磁珠孵育；C.洗涤去除未结合抗体；D.加入发光剂标记二抗；E.抗原抗体—二抗复合物结合；F.洗涤去除未结合二抗；G.注入预激发液和激发液读取发光信号

图1—2—8　流式探测器模块流动腔内工作原理

①磁珠在液鞘内流动，②并以单列纵队穿过流动腔。鞘液③包围着传输流④，使流动腔内形成流体聚焦。从而使磁珠逐个地接受分类激光⑤和报告激光⑥检测。引自：Bio—Rad Laboratories Inc.Bioplex® 2000 System操作手册（LB001012CN修订D），2019：44