粗颗粒型（AC—5）

三、粗颗粒型（AC—5）

【荧光核型特征】

1.分裂间期细胞·核浆呈粗斑点型荧光染色，核仁染色可有可无（图3—3—4）。

2.有丝分裂期细胞·有丝分裂中期、有丝分裂后期和有丝分裂末期细胞浓缩，染色体无染色（图3—3—4）。

【核型鉴别】

细颗粒型（AC—4）·见本节细颗粒型核型鉴别1。

【相关靶抗原】

（一）U1—snRNP和Sm

1.生物学功能·1966年Ten等人首次从SLE患者血清中分离得到抗Sm抗体，5年后又从SLE患者中发现一种新抗体，称为抗Mo抗体，其对核糖核酸酶（RNase）敏感，随后被命名为抗核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）、抗核核糖核蛋白（nuclear ribonucleoprotein，nRNP）或U1核小核糖核蛋白（U1 small nuclear ribonucleoprotein，U1—snRNP）抗体。双向免疫扩散法证明该抗体不同于抗Sm抗体，但其沉淀线部分与抗Sm抗体融合，表明两者存在部分共同抗原组分。现已证明其共同抗原组分为Sm环，是由七个分子量在9～29 kDa的蛋白组成的环状结构，分别为Sm B/B′、Sm D1、Sm D2、Sm D3、Sm E、Sm F和Sm G。可与富含尿嘧啶（uracil）的核小RNA（small nuclear RNA，snRNA）相互作用，形成U1、U2、U4～U6和U5核小核糖核蛋白（small nuclear ribonucleoprotein，snRNP）。snRNP是蛋白质—核糖核酸复合物，它与未修饰的前mRNA（precursor mRNA，pre—mRNA）和其他各种蛋白质结合形成剪接体（spliceosome），对于从pre—mRNA中去除内含子起关键作用，而内含子去除是真核基因表达的核心步骤，也是高效翻译的基本前提。每种snRNPs均有各自独特的蛋白，如U1—snRNP有蛋白U1—70k（70 kDa）、RNP—A（34 kDa）、RNP—C（23 kDa），U2—snRNP有蛋白U2—A′，U2—B″，U5—snRNP有蛋白U5—200k（200 kDa，WB在200 kDa左右可见双带）。

2.临床意义·抗U1—snRNP抗体与抗Sm抗体常同时检出，但其临床意义不同。

（1）抗Sm抗体：抗Sm抗体在SLE患者中虽敏感性较低（5％～30％），但高度特异，因而被ACR列入SLE的诊断标准。大部分抗Sm抗体阳性患者呈现典型SLE表现，但也有部分SLE患者合并其他疾病，如SSc和（或）自身免疫性肌病（autoimmune myopathy，AIM）。

与抗Sm抗体阳性相关的临床症状包括浆膜炎、狼疮性肾炎、中枢神经系统疾病如精神病和精神分裂症、肺纤维化、白细胞减少、关节炎、盘状皮疹、血管炎、收缩期肺动脉压升高、抗血红蛋白抗体阳性和口腔溃疡。

（2）抗U1—snRNP抗体：抗U1—snRNP抗体除见于SLE患者外，也可见于UCTD、SSc、AIM、SS，以及其他疾病。另外，抗U1—snRNP抗体是MCTD诊断标准之一［17］。MCTD的定义为一种以SLE、SSc、多发性肌炎等临床特征重叠，血清存在高滴度抗U1—snRNP抗体的疾病，因此MCTD患者均为抗U1—snRNP抗体阳性。

与抗U1—snRNP抗体阳性相关的临床症状主要包括ILD、快速进展的肺损伤、胸膜炎、中枢神经系统受累、雷诺现象、手指肿胀（香肠指）、白细胞减少、脑膜炎、疾病发病年龄较高、尿管型发生率降低、肾炎风险降低、关节炎、发热和肌炎。

3.检测方法·临床实验室一般采用ELISA、LIA、CLIA和流式荧光等方法检测抗Sm抗体和抗U1—snRNP抗体（表3—3—7）。科研实验室可采用WB、ALBIA和IP等方法进行检测。WB检测抗U1—snRNP抗体血清通常至少出现U1—70k、RNP—A、RNP—C、Sm B/B′条带，而抗Sm抗体最常出现Sm B/B′和SmD片段。Sm B/B′可同时被两种抗体识别，因此SmD常被作为检测抗Sm抗体的重要抗原。抗Sm抗体检测试剂盒包被的抗原一般有纯化的天然Sm（含Sm环）和重组SmD1特异性抗原。中国人群研究显示，以LIA检测抗SmD1抗体和抗Sm抗体在不同人群中阳性率分别为：SLE患者，61.0％ （抗SmD1抗体）vs.28.3％（抗Sm抗体）；其他风湿免疫病，13.3％（抗SmD1抗体）vs.2.2％（抗Sm抗体）；健康人群，9.1％（抗SmD1抗体）vs.0（抗Sm抗体）［18］。抗SmD1抗体对SLE患者检测敏感性高（抗SmD1抗体，68.0％ vs.抗Sm抗体，32.0％）但特异性低（抗SmD1抗体，88.1％ vs.抗Sm抗体，98.5％）［18］。抗U1—snRNP抗体是MCTD诊断标准之一，ELISA检测其对于MCTD诊断敏感性接近100％，但特异性较低，抗U1—70k抗体、抗RNP—A抗体和抗RNP—C抗体特异性分别为60％、20％和13％［19］。

（二）RNA聚合酶Ⅲ

1.生物学功能·真核细胞中的RNA聚合酶主要负责以DNA或RNA为模板，将其转录为RNA，这是蛋白合成的第一步。其中RNA聚合酶Ⅰ（RNA polymerase Ⅰ，RNAPⅠ）参与合成大部分核糖体RNA（ribosomal RNA，rRNA）；RNAPⅡ参与合成mRNA和许多非编码RNA（non-coding RNA），包括snRNA和微RNA（microRNA，miRNA）；RNAPⅢ参与合成短RNA，其中多数为转运RNA（transfer RNA，tRNA），另外也包括5S rRNA、U6—snRNA、核糖核酸酶P（ribonuclease P，RN ase P）的短非编码RNA组分、线粒体RNA加工（mitochondrial RNA processing）RNA、信号识别颗粒RNA，以及高等真核生物中部分微型和小RNA。

1993年Okano等人首次通过放射免疫沉淀法在SSc患者血清中发现抗RNAPⅢ抗体［20］。RNAPⅢ是一个由16个亚单位组成的大分子蛋白复合物，其中RP155分子量最大，由POLR3A基因编码，是RNAPⅢ特异性分子（不存在于RNAPⅠ/Ⅱ）；RP11由POLR3K基因编码，是RNAPⅢ亚单位中的重要亚基之一，介导RNAPⅢ裂解活性，在终止转录过程起关键作用。

RNAPⅢ转录活性与细胞生长和分裂相关，其高转录率是细胞维持生长所必需的。当哺乳动物细胞在静息状态时，RNAPⅢ转录活性含量较低。当细胞开始增殖时，RNAPⅢ的活性在G1/S期转变前达到最大值，然后在S期和G2期保持高活性。但部分肿瘤转化过程中对其管控降低，造成转化细胞和肿瘤细胞表达高水平的RNAPⅢ产物。

2.临床意义

（1）系统性硬化症：抗RNAPⅢ抗体检出于约11％～23％ SSc患者，其抗体水平并不与疾病的严重程度相关。抗RNAPⅢ抗体阳性患者一般较少发生严重的肺间质纤维化，但患dcSSc风险增加，皮肤受累和高血压肾病的可能性高，也是胃窦血管扩张（gastric antral vascular ectasia）的危险因素之一。相比其他引起dcSSc的自身抗体如抗topoⅠ抗体和抗U3—snoRNP抗体，抗RNAPⅢ抗体阳性患者10年生存率较高（抗RNAPⅢ，75％；抗topoⅠ抗体，65％；抗U3—snoRNP抗体，61％）［21］。

（2）系统性硬化症并发恶性肿瘤：抗RNAPⅢ抗体阳性SSc患者在发病三年内易并发恶性肿瘤，以乳腺癌最常见，其次为血液系统、胃肠道和妇科恶性肿瘤。其可能机制在于：部分癌症患者中存在POLR3A（编码RPC155）位点改变［体细胞突变和（或）杂合性丢失］，同时出现突变特异性和交叉反应性免疫反应，进而引起肿瘤。但值得注意的是，抗RPC155抗体阳性SSc患者若同时存在抗RPA194抗体（一种抗RNAPⅠ大亚单位抗体），并发肿瘤的可能性则大大降低。

3.检测方法·国内目前尚无检测抗RNAPⅢ抗体试剂盒。由于抗RNAPⅢ抗体通常和抗RNAPⅠ抗体同时出现，HEp—2 IFA可观察到由抗RNAPⅢ抗体引起的细颗粒样荧光染色伴明亮点状（呈现粗颗粒型AC—5）和由抗RNAPⅠ抗体引起的核仁颗粒样荧光染色（呈现核仁颗粒型AC—10）。科研采用的商品化试剂盒主要为包被人RP155蛋白891～1 080 AA重组片段的ELISA（表3—3—8）。此外，还可采用放射免疫沉淀法和WB检测抗RNAPⅢ抗体。

（三）异质性胞核核糖核蛋白

1.生物学功能·异质性胞核核糖核蛋白（heterogeneous nuclear ribonucleoprotein，hnRNP）复合体是真核细胞中新转录的pre—mRNA与大量蛋白质结合形成的核糖核蛋白复合体，进而与snRNPs和其他蛋白质结合形成剪接体，在剪接体中pre—mRNA被加工（剪接和多聚腺苷酸化）成为成熟的mRNA，随后被转运至细胞质中，成为剪切体（spliceosome）的主要成分。hnRNP复合物经核糖核酸酶进行限制性消化后，可以通过密度梯度离心分离出离散的hnRNP颗粒：含有约30种不同蛋白质，根据其分子量，按字母顺序命名，从hnRNP Al（34 kD）到hnRNP U（120 kD）。其中分子量为34～43 kD的hnRNP A1、hnRNP A2、hnRNP B1、hnRNP B2、hnRNP C1和hnRNP C2被称为hnRNP“核心”蛋白。

1989年Hassfeld等首次在RA患者中分离得到抗RA33抗体，后证实该抗体的靶抗原为hnRNP A2、hnRNP B1和hnRNP B2（RA33复合物）。hnRNP A/B结构通常由N端两个临近的RNA结合区域（RNA-binding domains）和C端含有50％甘氨酸的辅助结构域组成，可结合其他hnRNP蛋白或RNA。

2.临床意义

（1）类风湿关节炎：抗hnRNP A2/B1抗体又称为抗RA33抗体可见于35％ RA患者，是其重要血清标志物之一。IgA、IgG和IgM型抗RA33抗体诊断RA的敏感性分别为6％、6.2％和17.7％，特异性分别为97.5％、97.2％和95.8％。而临床常用的IgM型类风湿因子（rheumatoid factor，RF）与其相比特异性稍低（90％），但敏感性较高（64.8％）［24］。值得注意的是，抗RA33抗体可见于22％血清学阴性（即RF和抗瓜氨酸化蛋白抗体双阴性）RA患者［24］。此外，抗RA33抗体还可见于38％MCTD、23％ SLE和11％ SSc患者。

（2）白塞综合征：抗hnRNP A1抗体可见于30％汉族人白塞综合征（Behcet syndrome）患者，且抗hnRNPA1抗体阳性白塞综合征患者更易发生深静脉血栓。

（3）多发性硬化症：抗hnRNP B1抗体可在91.4％多发性硬化症（multiple sclerosis，MS）患者的脑脊液（cerebrospinal fluid，CSF）中检出，而血清中该抗体阴性，但CSF抗体水平与MS活动性无关［25］。

3.检测方法·国内实验室可采用商品化CLIA或ELISA检测抗RA33抗体，其包被靶抗原一般为纯化的重组hnRNP A2（表3—3—9）。科研实验室可采用LIA、WB［25］方法检测该抗体。